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0900 54 49 4f 4e f3 0c f3 f1 02 07 00 f1 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 00 00 00 00 01 20 15 00 TION............................
0920 d0 f1 03 07 00 f1 f1 02 08 00 f1 f2 0c f2 f1 03 08 00 f1 f1 02 07 00 f1 31 32 2f 32 33 2f 39 37 ........................12/23/97
0940 f1 03 07 00 f1 f1 02 08 00 f1 f3 0c f3 f1 03 08 00 f1 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 a0 05 f0 00 ................................
0960 01 00 01 20 15 00 d0 cc 54 68 69 73 80 70 72 6f 63 65 64 75 72 65 80 64 65 73 63 72 69 62 65 73 ........This.procedure.describes
0980 80 74 68 65 80 6d 65 74 68 6f 64 80 75 73 65 64 80 66 6f 72 80 69 73 6f 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f .the.method.used.for.isolation.o
09a0 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 75 73 65 64 f.monocytes.and.neutrophils.used
09c0 80 69 6e cf 62 6f 74 68 80 74 68 65 80 a2 63 68 65 6d 6f 74 61 78 69 73 a3 80 61 73 73 61 79 80 .in.both.the..chemotaxis..assay.
09e0 61 6e 64 80 a2 6d 69 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c a3 80 61 73 73 61 79 80 64 65 73 63 72 69 62 and..microbicidal..assay.describ
0a00 65 64 80 62 65 6c 6f 77 2e cc cc f2 0c f2 50 72 69 6e 63 69 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b ed.below......Principle.........
0a20 00 09 00 01 50 0a a0 05 06 00 01 20 15 00 d0 cc a2 48 65 70 61 72 69 6e 69 7a 65 64 a3 80 77 68 ....P............Heparinized..wh
0a40 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 69 73 80 6c 61 79 65 72 65 64 80 6f 6e 80 74 6f 70 80 6f 66 80 61 ole.blood.is.layered.on.top.of.a
0a60 80 64 65 6e 73 69 74 79 80 67 72 61 64 69 65 6e 74 80 6d 61 74 65 72 69 61 6c 80 28 a2 46 69 63 .density.gradient.material.(.Fic
0a80 6f 6c 6c a3 2f a2 48 79 70 61 71 75 65 a3 29 80 61 6e 64 cf 73 75 62 6a 65 63 74 65 64 80 74 6f oll./.Hypaque.).and.subjected.to
0aa0 80 61 80 63 65 6e 74 72 69 66 75 67 61 6c 80 66 6f 72 63 65 2e 80 80 53 69 6e 63 65 80 65 72 79 .a.centrifugal.force...Since.ery
0ac0 74 68 72 6f 63 79 74 65 73 80 28 52 42 43 29 80 61 6e 64 80 a2 50 4d 4e a3 80 61 72 65 80 6d 6f throcytes.(RBC).and..PMN..are.mo
0ae0 72 65 80 64 65 6e 73 65 80 74 68 61 6e 80 74 68 65 cf 67 72 61 64 69 65 6e 74 80 6d 61 74 65 72 re.dense.than.the.gradient.mater
0b00 69 61 6c 2c 80 74 68 65 79 80 70 65 6e 65 74 72 61 74 65 80 74 68 65 80 67 72 61 64 69 65 6e 74 ial,.they.penetrate.the.gradient
0b20 80 6d 61 74 65 72 69 61 6c 80 61 6e 64 80 73 65 64 69 6d 65 6e 74 80 74 6f 80 74 68 65 80 62 6f .material.and.sediment.to.the.bo
0b40 74 74 6f 6d 80 6f 66 80 74 68 65 cf 63 65 6e 74 72 69 66 75 67 65 80 74 75 62 65 2e 80 80 54 68 ttom.of.the.centrifuge.tube...Th
0b60 65 80 6c 69 67 68 74 65 72 80 6d 6f 6e 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 63 65 6c 6c 73 80 28 6c 79 6d e.lighter.mononuclear.cells.(lym
0b80 70 68 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 29 80 73 65 64 69 6d 65 6e 74 phocytes.and.monocytes).sediment
0ba0 80 74 6f 80 74 68 65 cf 70 6c 61 73 6d 61 84 64 65 6e 73 69 74 79 80 67 72 61 64 69 65 6e 74 80 .to.the.plasma.density.gradient.
0bc0 69 6e 74 65 72 66 61 63 65 2e 80 80 41 74 80 65 71 75 69 6c 69 62 72 69 75 6d 2c 80 74 68 65 80 interface...At.equilibrium,.the.
0be0 6d 6f 6e 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 63 65 6c 6c 73 80 61 72 65 80 63 61 72 65 66 75 6c 6c 79 80 mononuclear.cells.are.carefully.
0c00 61 73 70 69 72 61 74 65 64 cf 61 6e 64 80 73 61 76 65 64 2e 80 80 54 68 65 80 72 65 6d 61 69 6e aspirated.and.saved...The.remain
0c20 69 6e 67 80 70 6c 61 73 6d 61 80 61 6e 64 80 67 72 61 64 69 65 6e 74 80 6d 61 74 65 72 69 61 6c ing.plasma.and.gradient.material
0c40 80 61 72 65 80 61 73 70 69 72 61 74 65 64 80 64 6f 77 6e 80 74 6f 80 74 68 65 80 52 42 43 cf 69 .are.aspirated.down.to.the.RBC.i
0c60 6e 74 65 72 66 61 63 65 2e 80 80 54 68 65 80 6d 6f 6e 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 63 65 6c 6c 73 nterface...The.mononuclear.cells
0c80 80 61 72 65 80 6c 61 79 65 72 65 64 80 6f 6e 74 6f 80 67 65 6c 61 74 69 6e 84 63 6f 61 74 65 64 .are.layered.onto.gelatin.coated
0ca0 80 66 6c 61 73 6b 73 2c 80 61 6c 6c 6f 77 69 6e 67 80 74 68 65 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 cf .flasks,.allowing.the.monocytes.
0cc0 74 6f 80 61 64 68 65 72 65 2e 80 80 54 68 65 80 a2 6e 6f 6e 61 64 68 65 72 65 6e 74 a3 80 6d 6f to.adhere...The..nonadherent..mo
0ce0 6e 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 63 65 6c 6c 73 80 28 6c 79 6d 70 68 6f 63 79 74 65 73 29 80 61 72 nonuclear.cells.(lymphocytes).ar
0d00 65 80 63 61 72 65 66 75 6c 6c 79 80 64 65 63 61 6e 74 65 64 2e 80 80 54 68 65 cf 61 64 68 65 72 e.carefully.decanted...The.adher
0d20 65 6e 74 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 72 65 80 64 69 73 6c 6f 64 67 65 64 80 66 72 6f 6d ent.monocytes.are.dislodged.from
0d40 80 74 68 65 80 67 65 6c 61 74 69 6e 84 63 6f 61 74 65 64 80 73 75 72 66 61 63 65 73 80 77 69 74 .the.gelatin.coated.surfaces.wit
0d60 68 80 76 69 67 6f 72 6f 75 73 80 a2 70 69 70 65 74 69 6e 67 a3 2e 80 80 54 68 65 cf 52 42 43 80 h.vigorous..pipeting....The.RBC.
0d80 63 75 73 68 69 6f 6e 80 28 77 68 69 63 68 80 61 6c 73 6f 80 63 6f 6e 74 61 69 6e 73 80 a2 50 4d cushion.(which.also.contains..PM
0da0 4e a3 29 80 69 73 80 a2 72 65 73 75 73 70 65 6e 64 65 64 a3 80 74 6f 80 74 68 65 80 69 6e 69 74 N.).is..resuspended..to.the.init
0dc0 69 61 6c 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 76 6f 6c 75 6d 65 2e 80 cf 44 65 78 74 72 61 6e ial.whole.blood.volume...Dextran
0de0 80 35 30 30 80 69 73 80 61 64 64 65 64 80 74 6f 80 61 80 66 69 6e 61 6c 80 63 6f 6e 63 65 6e 74 .500.is.added.to.a.final.concent
0e00 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 31 25 80 61 6e 64 80 6d 69 78 65 64 2e 80 80 54 68 65 80 52 42 43 ration.of.1%.and.mixed...The.RBC
0e20 80 61 72 65 80 61 6c 6c 6f 77 65 64 80 74 6f cf 73 65 64 69 6d 65 6e 74 80 74 6f 80 74 68 65 80 .are.allowed.to.sediment.to.the.
0e40 62 6f 74 74 6f 6d 80 6f 66 80 74 68 65 80 63 65 6e 74 72 69 66 75 67 65 80 74 75 62 65 2e 80 80 bottom.of.the.centrifuge.tube...
0e60 54 68 65 80 a2 50 4d 4e a3 80 72 65 6d 61 69 6e 80 69 6e 80 73 75 73 70 65 6e 73 69 6f 6e 2e 80 The..PMN..remain.in.suspension..
0e80 80 54 68 65 80 a2 50 4d 4e a3 84 72 69 63 68 cf 73 75 70 65 72 6e 61 74 61 6e 74 80 69 73 80 63 .The..PMN..rich.supernatant.is.c
0ea0 61 72 65 66 75 6c 6c 79 80 61 73 70 69 72 61 74 65 64 2e cc cc f2 0c f2 53 70 65 63 69 6d 65 6e arefully.aspirated......Specimen
0ec0 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 50 19 a0 14 16 00 01 20 15 00 d0 cc 49 64 65 61 6c 6c 79 .............P...........Ideally
0ee0 2c 80 31 35 80 74 6f 80 32 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 a2 68 65 70 61 72 69 6e 69 7a 65 64 a3 80 77 ,.15.to.20.ml.of..heparinized..w
0f00 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 28 34 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 80 a2 63 hole.blood.(40.ml.of.monocyte..c
0f20 68 65 6d 6f 74 61 78 69 73 a3 80 61 73 73 61 79 29 80 73 68 6f 75 6c 64 cf 62 65 80 63 6f 6c 6c hemotaxis..assay).should.be.coll
0f40 65 63 74 65 64 80 66 72 6f 6d 80 62 6f 74 68 80 74 68 65 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 61 6e 64 80 ected.from.both.the.patient.and.
0f60 61 80 6e 6f 72 6d 61 6c 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 73 75 62 6a 65 63 74 2e 80 80 44 65 70 65 6e a.normal.control.subject...Depen
0f80 64 69 6e 67 80 6f 6e 80 74 68 65 80 70 61 74 69 65 6e 74 27 73 cf 61 62 73 6f 6c 75 74 65 80 6d ding.on.the.patient's.absolute.m
0fa0 6f 6e 6f 63 79 74 65 80 61 6e 64 2f 6f 72 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 80 63 6f 75 6e 74 2c onocyte.and/or.neutrophil.count,
0fc0 80 61 80 73 75 66 66 69 63 69 65 6e 74 80 6e 75 6d 62 65 72 80 6f 66 80 63 65 6c 6c 73 80 6d 61 .a.sufficient.number.of.cells.ma
0fe0 79 80 62 65 80 6f 62 74 61 69 6e 65 64 80 66 72 6f 6d 80 61 cf 73 6d 61 6c 6c 65 72 80 76 6f 6c y.be.obtained.from.a.smaller.vol
1000 75 6d 65 2e cc cc f2 0c f2 52 65 61 67 65 6e 74 73 80 61 6e 64 80 53 75 70 70 6c 69 65 73 f3 0c ume......Reagents.and.Supplies..
1020 f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 e0 1f 30 1b 1d 00 01 20 15 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 .............0..........0.......
1040 0c 00 e0 48 61 6e 6b 73 80 62 61 6c 61 6e 63 65 64 80 73 61 6c 74 80 73 6f 6c 75 74 69 6f 6e 80 ...Hanks.balanced.salt.solution.
1060 28 a2 48 42 53 53 a3 29 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 08 07 28 23 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 (.HBSS.)............(#..(#......
1080 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 25 80 47 65 6c 61 74 69 6e 3a 80 64 69 73 73 6f 6c 76 65 80 0..........1%.Gelatin:.dissolve.
10a0 32 80 67 80 6f 66 80 a2 65 6e 64 6f 74 6f 78 69 6e a3 84 66 72 65 65 80 67 65 6c 61 74 69 6e 80 2.g.of..endotoxin..free.gelatin.
10c0 69 6e 80 31 30 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 70 68 6f 73 70 68 61 74 65 84 62 75 66 66 65 72 65 64 80 in.100.ml.of.phosphate.buffered.
10e0 80 80 80 80 80 80 80 cf 73 61 6c 69 6e 65 80 28 50 42 53 29 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 08 07 ........saline.(PBS)............
1100 28 23 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 44 65 78 74 72 61 6e 80 54 (#..(#......0..........Dextran.T
1120 84 35 30 30 80 28 a2 50 68 61 72 6d 61 63 69 61 a3 29 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 08 07 28 23 .500.(.Pharmacia.)............(#
1140 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 36 25 80 44 65 78 74 72 61 6e 3a ..(#......0..........6%.Dextran:
1160 80 64 69 73 73 6f 6c 76 65 80 36 80 67 80 6f 66 80 44 65 78 74 72 61 6e 80 54 84 35 30 30 80 69 .dissolve.6.g.of.Dextran.T.500.i
1180 6e 80 31 30 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 30 2e 38 35 25 80 6f 66 80 a2 4e 61 63 6c a3 d0 04 17 00 00 n.100.ml.of.0.85%.of..Nacl......
11a0 0d 00 0b 00 02 08 07 28 23 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 30 2e .......(#..(#......0..........0.
11c0 30 35 25 80 47 65 6e 74 69 61 6e 80 76 69 6f 6c 65 74 80 69 6e 80 32 25 80 61 63 65 74 69 63 80 05%.Gentian.violet.in.2%.acetic.
11e0 61 63 69 64 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 08 07 28 23 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 acid............(#..(#......0...
1200 00 00 08 07 0c 00 e0 a2 46 69 63 6f 6c 6c a3 84 a2 50 61 71 75 65 a3 80 28 a2 50 68 61 72 6d 61 ........Ficoll...Paque..(.Pharma
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1ac0 00 0b 00 09 00 01 e0 1f 30 1b 1d 00 01 20 15 00 d0 64 69 6c 2e 29 80 61 6e 64 80 64 65 74 65 72 ........0........dil.).and.deter
1ae0 6d 69 6e 65 80 63 65 6c 6c 80 64 65 6e 73 69 74 79 80 77 69 74 68 80 61 80 a2 68 65 6d 61 63 79 mine.cell.density.with.a..hemacy
1b00 74 6f 6d 65 74 65 72 a3 2e 80 80 41 74 80 74 68 69 73 80 70 6f 69 6e 74 2c 80 74 68 65 80 a2 50 tometer....At.this.point,.the..P
1b20 4d 4e a3 80 61 72 65 cf 72 65 61 64 79 80 74 6f 80 62 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 65 64 80 66 6f MN..are.ready.to.be.evaluated.fo
1b40 72 80 74 68 65 69 72 80 a2 63 68 65 6d 6f 74 61 63 74 69 63 a3 80 61 6e 64 2f 6f 72 80 a2 6d 69 r.their..chemotactic..and/or..mi
1b60 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c a3 80 61 63 74 69 76 69 74 79 80 61 73 cf 64 65 73 63 72 69 62 65 crobicidal..activity.as.describe
1b80 64 80 62 65 6c 6f 77 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 17 00 d0 cc d.below...........`.(#`.(#......
1ba0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 34 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 .0..........14..0.....`...(#..(#
1bc0 14 00 e0 4d 6f 6e 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 63 65 6c 6c 73 80 70 72 65 70 61 72 65 64 80 61 73 ...Mononuclear.cells.prepared.as
1be0 80 64 65 73 63 72 69 62 65 64 80 61 62 6f 76 65 80 66 6f 72 80 73 74 65 70 80 36 80 61 72 65 80 .described.above.for.step.6.are.
1c00 61 64 6a 75 73 74 65 64 80 74 6f 80 31 30 f2 05 f2 37 f3 05 f3 80 63 65 6c 6c 73 d0 01 15 00 00 adjusted.to.10...7....cells.....
1c20 0b 00 09 00 01 90 24 e0 1f 22 00 01 20 15 00 d0 70 65 72 80 6d 6c 2e 80 80 41 64 64 80 33 80 6d ......$.."......per.ml...Add.3.m
1c40 6c 80 74 6f 80 37 35 80 a2 63 6d f2 05 f2 32 a3 f3 05 f3 80 74 69 73 73 75 65 80 63 75 6c 74 75 l.to.75..cm...2.....tissue.cultu
1c60 72 65 80 66 6c 61 73 6b 73 80 77 68 69 63 68 80 68 61 76 65 80 62 65 65 6e 80 a2 70 72 65 63 6f re.flasks.which.have.been..preco
1c80 61 74 65 64 a3 80 77 69 74 68 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 25 d0 20 23 00 01 20 15 00 d0 31 ated..with...........%..#......1
1ca0 25 80 a2 65 6e 64 6f 74 6f 78 69 6e a3 84 66 72 65 65 80 67 65 6c 61 74 69 6e 80 61 6e 64 80 73 %..endotoxin..free.gelatin.and.s
1cc0 74 6f 72 65 64 80 61 74 80 34 f0 24 06 f0 43 80 75 6e 74 69 6c 80 75 73 65 64 2e d0 04 1f 00 00 tored.at.4.$..C.until.used......
1ce0 15 00 13 00 01 70 26 c0 21 24 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 .....p&.!$...`.(#`.(#.......0...
1d00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 35 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 49 6e .......15..0.....`...(#..(#...In
1d20 63 75 62 61 74 65 80 66 6c 61 73 6b 73 80 66 6f 72 80 31 80 68 80 61 74 80 33 37 f0 24 06 f0 43 cubate.flasks.for.1.h.at.37.$..C
1d40 80 74 6f 80 61 6c 6c 6f 77 80 61 64 68 65 72 65 6e 63 65 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 .to.allow.adherence.of.monocytes
1d60 2e d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 50 28 a0 23 26 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 ...........P(.#&...`.(#`.(#.....
1d80 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 36 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 ..0..........16..0.....`...(#..(
1da0 23 14 00 e0 57 61 73 68 80 66 6c 61 73 6b 80 66 69 76 65 80 74 69 6d 65 73 80 77 69 74 68 80 31 #...Wash.flask.five.times.with.1
1dc0 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 77 61 72 6d 80 a2 48 42 53 53 a3 80 74 6f 80 72 65 6d 6f 76 65 80 a2 6e 0.ml.of.warm..HBSS..to.remove..n
1de0 6f 6e 61 64 68 65 72 65 6e 74 a3 80 63 65 6c 6c 73 2e d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 30 2a 80 25 onadherent..cells...........0*.%
1e00 28 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 37 (...`.(#`.(#.......0..........17
1e20 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 52 65 6d 6f 76 65 80 61 64 68 65 ..0.....`...(#..(#...Remove.adhe
1e40 72 65 6e 74 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 62 79 80 76 69 67 6f 72 6f 75 73 80 a2 70 69 70 65 rent.monocytes.by.vigorous..pipe
1e60 74 69 6e 67 a3 80 77 69 74 68 80 31 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 63 6f 6c 64 80 a2 48 42 53 53 a3 2e ting..with.10.ml.of.cold..HBSS..
1e80 d0 06 1f 00 00 15 00 13 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 87 ...........,`'*...`.(#`.(#......
1ea0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 38 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 .0..........18..0.....`...(#..(#
1ec0 14 00 e0 43 65 6e 74 72 69 66 75 67 65 80 63 65 6c 6c 73 80 61 74 80 31 30 30 80 78 80 67 80 66 ...Centrifuge.cells.at.100.x.g.f
1ee0 6f 72 80 31 30 80 6d 69 6e 80 61 6e 64 80 72 65 73 75 73 70 65 6e 64 80 69 6e 80 31 80 6d 6c 80 or.10.min.and.resuspend.in.1.ml.
1f00 6f 66 80 63 6f 6c 64 80 a2 48 42 53 53 a3 2e d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 b0 04 00 00 00 00 01 of.cold..HBSS...................
1f20 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc cc d4 26 0c 00 01 02 00 b0 04 0c 00 d4 e0 30 0c 00 .`.(#`.(#........&...........0..
1f40 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 39 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 54 ........19..0.....`...(#..(#...T
1f60 6f 80 30 2e 31 39 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 30 2e 30 35 25 80 67 65 6e 74 69 61 6e 80 76 69 6f 6c o.0.190.ml.of.0.05%.gentian.viol
1f80 65 74 80 61 64 64 80 30 2e 30 31 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 80 63 65 6c 6c et.add.0.010.ml.of.monocyte.cell
1fa0 80 73 75 73 70 65 6e 73 69 6f 6e d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 07 d0 02 03 00 01 20 15 00 d0 .suspension.....................
1fc0 28 31 3a 32 30 80 64 69 6c 75 74 69 6f 6e 29 80 61 6e 64 80 64 65 74 65 72 6d 69 6e 65 80 63 65 (1:20.dilution).and.determine.ce
1fe0 6c 6c 80 64 65 6e 73 69 74 79 80 77 69 74 68 80 61 80 a2 68 65 6d 61 63 79 74 6f 6d 65 74 65 72 ll.density.with.a..hemacytometer
2000 a3 2e 80 80 41 74 80 74 68 69 73 80 70 6f 69 6e 74 80 74 68 65 cf 69 73 6f 6c 61 74 65 64 80 6d ....At.this.point.the.isolated.m
2020 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 72 65 80 70 72 65 70 61 72 65 64 80 74 6f 80 62 65 80 73 74 75 64 onocytes.are.prepared.to.be.stud
2040 69 65 64 80 66 6f 72 80 74 68 65 69 72 80 a2 63 68 65 6d 6f 74 61 63 74 69 63 a3 80 61 6e 64 2f ied.for.their..chemotactic..and/
2060 6f 72 cf a2 6d 69 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c a3 80 61 63 74 69 76 69 74 79 80 61 73 80 64 65 or..microbicidal..activity.as.de
2080 73 63 72 69 62 65 64 80 62 65 6c 6f 77 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 scribed.below...........`.(#`.(#
20a0 02 20 17 00 d0 d4 27 13 00 01 02 00 b0 04 03 80 07 da 18 00 00 13 00 d4 cc cc f2 0c f2 a2 4d 49 ......'.......................MI
20c0 43 52 4f 42 49 43 49 44 41 4c a3 80 41 53 53 41 59 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 20 0d CROBICIDAL..ASSAY...............
20e0 70 08 09 00 01 20 15 00 d0 cc f2 0c f2 50 72 69 6e 63 69 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 p............Principle..........
2100 09 00 01 00 0f 50 0a 0b 00 01 20 15 00 d0 cc 54 68 65 80 a2 6d 69 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c .....P.........The..microbicidal
2120 a3 80 61 73 73 61 79 80 68 61 73 80 6c 6f 6e 67 80 62 65 65 6e 80 63 6f 6e 73 69 64 65 72 65 64 ..assay.has.long.been.considered
2140 80 74 68 65 80 62 65 73 74 80 66 75 6e 63 74 69 6f 6e 61 6c 80 61 73 73 61 79 80 66 6f 72 80 74 .the.best.functional.assay.for.t
2160 68 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 cf 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 80 66 75 6e 63 74 he.evaluation.of.phagocyte.funct
2180 69 6f 6e 80 28 31 32 29 2e 80 80 49 74 80 72 65 71 75 69 72 65 73 80 61 6e 80 61 63 74 69 76 65 ion.(12)...It.requires.an.active
21a0 80 72 65 73 70 69 72 61 74 6f 72 79 80 62 75 72 73 74 80 61 6e 64 80 66 75 6e 63 74 69 6f 6e 61 .respiratory.burst.and.functiona
21c0 6c 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 69 63 cf 6d 65 63 68 61 6e 69 73 6d 2e 80 80 54 68 65 80 74 65 73 l.phagocytic.mechanism...The.tes
21e0 74 80 69 73 80 62 61 73 65 64 80 6f 6e 80 74 68 65 80 61 64 64 69 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 a2 6f t.is.based.on.the.addition.of..o
2200 70 73 6f 6e 69 7a 65 64 a3 80 62 61 63 74 65 72 69 61 80 74 6f 80 70 75 72 69 66 69 65 64 80 6d psonized..bacteria.to.purified.m
2220 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 cf 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 61 74 80 6b 6e 6f 77 6e onocytes.or.neutrophils.at.known
2240 80 62 61 63 74 65 72 69 61 84 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 80 72 61 74 69 6f 73 2c 80 66 6f 6c 6c .bacteria.phagocyte.ratios,.foll
2260 6f 77 65 64 80 62 79 80 69 6e 63 75 62 61 74 69 6f 6e 80 61 74 80 33 37 f0 24 06 f0 80 43 80 77 owed.by.incubation.at.37.$...C.w
2280 69 74 68 80 73 61 6d 70 6c 69 6e 67 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 13 00 0f 10 00 01 20 15 00 ith.sampling....................
22a0 d0 6f 66 80 72 65 61 63 74 69 6f 6e 73 80 61 74 80 61 80 33 30 84 6d 69 6e 80 69 6e 74 65 72 76 .of.reactions.at.a.30.min.interv
22c0 61 6c 73 80 75 70 80 74 6f 80 32 80 68 2e 80 80 54 68 65 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 61 72 65 80 als.up.to.2.h...The.samples.are.
22e0 74 68 65 6e 80 70 6c 61 74 65 64 80 6f 6e 80 62 6c 6f 6f 64 80 61 67 61 72 80 70 6c 61 74 65 73 then.plated.on.blood.agar.plates
2300 cf 66 6f 6c 6c 6f 77 65 64 80 62 79 80 6f 76 65 72 6e 69 67 68 74 80 69 6e 63 75 62 61 74 69 6f .followed.by.overnight.incubatio
2320 6e 80 61 74 80 33 37 f0 24 06 f0 80 43 80 74 6f 80 61 6c 6c 6f 77 80 76 69 61 62 6c 65 80 62 61 n.at.37.$...C.to.allow.viable.ba
2340 63 74 65 72 69 61 80 74 6f 80 67 72 6f 77 80 69 6e 74 6f 80 76 69 73 69 62 6c 65 80 63 6f 6c 6f cteria.to.grow.into.visible.colo
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2380 6f 6c 6f 6e 69 65 73 80 61 72 65 80 63 6f 75 6e 74 65 64 80 66 6f 72 80 65 61 63 68 80 74 69 6d olonies.are.counted.for.each.tim
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2740 00 0b 00 02 08 07 28 23 08 07 28 23 02 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 a2 48 42 ......(#..(#......0...........HB
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2780 00 08 07 0c 00 e0 43 6f 6e 74 72 6f 6c 80 a2 6f 70 73 6f 6e 69 6e a3 84 70 6f 6f 6c 65 64 80 73 ......Control..opsonin..pooled.s
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2880 65 64 80 70 72 69 6f 72 80 74 6f 80 75 73 65 80 62 79 80 72 6f 75 74 69 6e 65 80 35 30 25 80 68 ed.prior.to.use.by.routine.50%.h
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2960 0c 00 d4 f2 0c f2 50 72 6f 63 65 64 75 72 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 00 00 ......Procedure.................
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2a20 00 c0 03 03 b0 04 01 23 00 00 13 00 d4 31 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 4d 75 65 6c 6c 65 72 84 48 69 .......#.....10.ml.of.Mueller.Hi
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2ac0 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 41 6c 69 71 75 6f 74 80 32 2e 35 80 6d 6c 80 6f 66 80 30 2e 31 25 80 (#..(#...Aliquot.2.5.ml.of.0.1%.
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2c60 6d 6f 76 65 80 f2 08 f2 53 2e 80 61 75 72 65 75 73 f3 08 f3 80 66 72 6f 6d 80 69 6e 63 75 62 61 move....S..aureus....from.incuba
2c80 74 6f 72 80 61 6e 64 80 63 65 6e 74 72 69 66 75 67 65 80 61 74 80 39 30 30 80 78 80 67 80 66 6f tor.and.centrifuge.at.900.x.g.fo
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2cc0 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 35 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 .(#.......0..........5..0.....`.
2ce0 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 52 65 73 75 73 70 65 6e 64 80 74 68 65 80 63 65 6c 6c 80 70 65 ..(#..(#...Resuspend.the.cell.pe
2d00 6c 6c 65 74 80 69 6e 80 31 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 30 2e 31 25 80 67 65 6c 61 74 69 6e 80 61 6e llet.in.10.ml.of.0.1%.gelatin.an
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2d40 15 00 00 0b 00 09 00 01 d0 11 20 0d 0e 00 01 20 15 00 d0 6d 69 6e 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 ...................min..........
2d60 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 36 2e e0 30 14 .`.(#`.(#.......0..........6..0.
2d80 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 52 65 73 75 73 70 65 6e 64 80 74 68 65 80 63 ....`...(#..(#...Resuspend.the.c
2da0 65 6c 6c 80 70 65 6c 6c 65 74 80 69 6e 80 31 80 6d 6c 80 6f 66 80 30 2e 31 25 80 67 65 6c 61 74 ell.pellet.in.1.ml.of.0.1%.gelat
2dc0 69 6e 2e d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 a0 14 f0 0f 11 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f in...................`.(#`.(#...
2de0 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 37 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 ....0..........7..0.....`...(#..
2e00 28 23 14 00 e0 50 72 65 70 61 72 65 80 31 2f 33 30 2c 80 31 2f 36 30 2c 80 31 2f 31 32 30 2c 80 (#...Prepare.1/30,.1/60,.1/120,.
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2e80 0c 00 e0 38 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 5a 65 72 6f 80 6f 72 ...8..0.....`...(#..(#...Zero.or
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3220 23 08 07 28 23 14 00 e0 52 65 6d 6f 76 65 80 33 30 80 62 6c 6f 6f 64 80 61 67 61 72 80 70 6c 61 #..(#...Remove.30.blood.agar.pla
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3280 0b 00 09 00 01 a0 23 f0 1e 21 00 01 20 15 00 d0 a2 41 39 30 a3 2c 80 61 6e 64 80 a2 41 6c 32 30 ......#..!.......A90.,.and..Al20
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3480 0a 00 00 00 00 0a 00 e2 d0 06 15 00 00 0b 00 09 00 01 30 2a 80 25 28 00 01 20 15 00 d0 d4 26 0c ..................0*.%(.......&.
34a0 00 01 02 00 c0 03 0c 00 d4 e2 02 0a 00 00 00 00 0a 00 e2 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 ....................0..........1
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3580 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 30 2e 38 35 80 6d 6c 80 6f 66 80 a2 48 42 53 53 a3 80 70 6c 75 `.(#`.(#...0.85.ml.of..HBSS..plu
35a0 73 80 30 2e 31 35 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 a2 6f 70 73 6f 6e 69 6e a3 d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 s.0.150.ml.of..opsonin..........
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35e0 00 0e 00 d3 d4 27 13 00 01 02 00 c0 03 03 b0 04 47 2e 00 00 13 00 d4 e0 30 0c 00 00 00 00 b0 04 .....'..........G.......0.......
3600 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 08 07 b0 04 28 23 b0 04 28 23 14 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 ....0.........(#..(#....0.....`.
3620 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 42 29 e0 30 14 00 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 ..(#..(#...(B).0.......`.(#`.(#.
3640 00 e0 30 2e 38 35 80 6d 6c 80 6f 66 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 a2 50 4d 4e a3 80 70 6c 75 73 80 ..0.85.ml.of.control..PMN..plus.
3660 30 2e 31 35 30 80 6d 6c 80 6f 66 80 a2 6f 70 73 6f 6e 69 6e a3 d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 80 0.150.ml.of..opsonin............
3680 07 d0 02 03 00 01 02 b8 0b 28 23 b8 0b 28 23 02 20 1f 00 d0 d3 0b 0e 00 00 02 00 00 00 20 fe 0e .........(#..(#.................
36a0 00 d3 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 ...0...........0.....`...(#..(#.
36c0 00 e0 28 43 29 e0 30 14 00 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 30 2e 38 35 80 6d 6c ..(C).0.......`.(#`.(#...0.85.ml
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3720 28 23 b8 0b 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 33 2e e0 30 14 00 00 (#..(#.......0..........13..0...
3740 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 41 64 64 80 30 2e 30 32 35 80 6d 6c 80 6f 66 80 f2 ..`...(#..(#...Add.0.025.ml.of..
3760 08 f2 53 2e 80 a2 61 75 65 72 65 75 73 a3 f3 08 f3 80 28 30 2e 31 80 6f 70 74 69 63 61 6c 80 64 ..S...auereus.....(0.1.optical.d
3780 65 6e 73 69 74 79 80 61 74 80 36 32 30 80 a2 6e 6d a3 29 80 74 6f 80 65 61 63 68 80 72 65 61 63 ensity.at.620..nm.).to.each.reac
37a0 74 69 6f 6e 80 74 75 62 65 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 50 0a a0 05 06 00 01 20 15 00 d0 61 6e tion.tube..........P..........an
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37e0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 34 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 ..0..........14..0.....`...(#..(
3800 23 14 00 e0 49 6d 6d 65 64 69 61 74 65 6c 79 80 72 65 6d 6f 76 65 80 31 30 80 a2 f0 19 08 f0 6c #...Immediately.remove.10......l
3820 a3 80 66 72 6f 6d 80 65 61 63 68 80 72 65 61 63 74 69 6f 6e 80 74 75 62 65 80 61 6e 64 80 61 64 ..from.each.reaction.tube.and.ad
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3920 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 49 6d 6d 65 64 69 61 74 65 6c 79 80 70 6c 61 63 65 ..`...(#..(#...Immediately.place
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39c0 08 07 0c 00 e0 31 36 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 56 6f 72 74 .....16..0.....`...(#..(#...Vort
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3a20 74 6f 80 61 70 70 72 6f 70 72 69 61 74 65 6c 79 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 13 00 0f 10 00 to.appropriately................
3a40 01 20 15 00 d0 6c 61 62 65 6c 65 64 80 62 6c 6f 6f 64 80 61 67 61 72 80 70 6c 61 74 65 73 2c 80 .....labeled.blood.agar.plates,.
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3ac0 6f 76 65 72 6e 69 67 68 74 80 69 6e 63 75 62 61 74 69 6f 6e 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 overnight.incubation...........`
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3b00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 52 65 6d 6f 76 65 80 74 68 65 80 72 65 61 63 74 ...`...(#..(#...Remove.the.react
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3be0 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 38 2e e0 11 0c 00 00 00 00 60 09 0c 00 e0 49 6e 63 75 62 61 74 ..........18........`....Incubat
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3c60 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 4e 65 78 74 80 64 61 79 2c 80 63 6f 75 6e 74 80 74 ..`...(#..(#...Next.day,.count.t
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3cc0 00 0b 00 09 00 01 20 1c 70 17 19 00 01 20 15 00 d0 64 75 70 6c 69 63 61 74 65 2c 80 61 6e 64 80 ........p........duplicate,.and.
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3d80 61 6e 64 80 43 4f 80 74 68 72 6f 75 67 68 80 a2 43 31 32 30 a3 80 6f 6e 80 6c 69 6e 65 61 72 80 and.CO.through..C120..on.linear.
3da0 67 72 61 70 68 80 70 61 70 65 72 2c 80 75 73 69 6e 67 80 a2 41 4f a3 80 74 68 72 6f 75 67 68 cf graph.paper,.using..AO..through.
3dc0 a2 41 31 32 30 a3 80 61 73 80 30 25 80 6b 69 6c 6c 80 76 61 6c 75 65 73 2e d0 04 17 00 00 0d 00 .A120..as.0%.kill.values........
3de0 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 17 00 d0 cc f2 0c f2 49 6e 74 65 72 70 72 65 74 61 74 69 ...`.(#`.(#.........Interpretati
3e00 6f 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 c0 21 10 1d 1f 00 01 20 15 00 d0 cc 54 68 65 80 72 on..............!..........The.r
3e20 65 61 63 74 69 6f 6e 80 74 75 62 65 80 28 42 29 80 63 6f 6e 74 61 69 6e 69 6e 67 80 63 6f 6e 74 eaction.tube.(B).containing.cont
3e40 72 6f 6c 80 a2 50 4d 4e a3 80 61 6c 6f 6e 67 80 77 69 74 68 80 a2 6f 70 73 6f 6e 69 6e a3 80 61 rol..PMN..along.with..opsonin..a
3e60 6e 64 80 62 61 63 74 65 72 69 61 80 73 68 6f 75 6c 64 cf 64 65 6d 6f 6e 73 74 72 61 74 65 80 67 nd.bacteria.should.demonstrate.g
3e80 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 30 25 80 6b 69 6c 6c 69 6e 67 80 61 74 80 32 80 68 2e 80 reater.than.90%.killing.at.2.h..
3ea0 9c f1 00 01 00 f1 80 50 61 74 69 65 6e 74 73 80 77 69 74 68 80 61 75 74 6f 73 6f 6d 61 6c 80 6f .......Patients.with.autosomal.o
3ec0 72 80 58 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 a2 43 47 44 a3 80 73 68 6f 77 cf 6c 69 74 74 6c 65 80 69 66 80 r.X.linked..CGD..show.little.if.
3ee0 61 6e 79 80 6b 69 6c 6c 69 6e 67 2c 80 77 68 69 6c 65 80 68 65 74 65 72 6f 7a 79 67 6f 75 73 80 any.killing,.while.heterozygous.
3f00 63 61 72 72 69 65 72 73 80 6f 66 80 74 68 65 80 64 69 73 65 61 73 65 80 64 65 6d 6f 6e 73 74 72 carriers.of.the.disease.demonstr
3f20 61 74 65 80 6b 69 6c 6c 69 6e 67 80 73 6f 6d 65 77 68 65 72 65 cf 62 65 74 77 65 65 6e 80 33 30 ate.killing.somewhere.between.30
3f40 25 80 61 6e 64 80 37 30 25 80 6f 66 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 2e f1 01 01 00 f1 9b cc cc cc 9c d4 %.and.70%.of.control............
3f60 26 0c 00 01 02 00 b0 04 0c 00 d4 f2 0c f2 43 48 45 4d 4f 54 41 58 49 53 80 41 53 53 41 59 f3 0c &.............CHEMOTAXIS.ASSAY..
3f80 f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 60 27 b0 22 25 00 01 20 15 00 d0 cc f2 0c f2 50 72 69 6e 63 69 ...........`'."%..........Princi
3fa0 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 40 29 90 24 27 00 01 20 15 00 d0 cc 44 69 72 65 ple.............@).$'.......Dire
3fc0 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 62 6f 74 68 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 cted.migration.of.both.monocytes
3fe0 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 69 6e 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 80 74 6f 80 .and.neutrophils.in.response.to.
4000 73 70 65 63 69 66 69 63 80 63 68 65 6d 6f 74 61 63 74 69 63 80 d4 27 13 00 01 02 00 b0 04 03 60 specific.chemotactic..'........`
4020 27 09 39 00 00 13 00 d4 73 74 69 6d 75 6c 69 cf 69 73 80 74 68 65 80 66 69 72 73 74 80 63 72 75 '.9.....stimuli.is.the.first.cru
4040 63 69 61 6c 80 73 74 65 70 80 69 6e 80 74 68 65 80 73 65 71 75 65 6e 63 65 80 6f 66 80 65 76 65 cial.step.in.the.sequence.of.eve
4060 6e 74 73 80 6c 65 61 64 69 6e 67 80 74 6f 80 61 63 75 74 65 80 61 6e 64 80 63 68 72 6f 6e 69 63 nts.leading.to.acute.and.chronic
4080 80 69 6e 66 6c 61 6d 6d 61 74 6f 72 79 d0 03 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 .inflammatory...........,`'*....
40a0 00 d0 72 65 73 70 6f 6e 73 65 73 80 28 31 34 29 2e 80 80 43 65 6c 6c 80 73 75 72 66 61 63 65 80 ..responses.(14)...Cell.surface.
40c0 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 66 6f 72 80 76 61 72 69 6f 75 73 80 73 74 69 6d 75 6c 69 80 66 75 receptors.for.various.stimuli.fu
40e0 6e 63 74 69 6f 6e 80 69 6e 80 63 6f 6e 63 65 72 74 80 77 69 74 68 80 61 64 68 65 73 69 6f 6e cf nction.in.concert.with.adhesion.
4100 6d 6f 6c 65 63 75 6c 65 73 80 6f 6e 80 74 68 65 80 73 75 72 66 61 63 65 80 6f 66 80 74 68 65 80 molecules.on.the.surface.of.the.
4120 63 65 6c 6c 80 61 6c 6f 6e 67 80 77 69 74 68 80 69 6e 74 72 61 63 65 6c 6c 75 6c 61 72 80 72 65 cell.along.with.intracellular.re
4140 63 79 63 6c 69 6e 67 80 6f 66 80 46 84 61 63 74 69 6e 80 70 6f 6c 79 6d 65 72 69 7a 61 74 69 6f cycling.of.F.actin.polymerizatio
4160 6e 2e 80 cf 54 68 65 73 65 80 65 76 65 6e 74 73 80 72 65 73 75 6c 74 80 69 6e 80 74 68 65 80 64 n...These.events.result.in.the.d
4180 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 6f 73 65 irected.migration.of.phagocytose
41a0 80 74 6f 80 6c 6f 63 61 6c 80 73 69 74 65 73 80 6f 66 80 69 6e 66 6c 61 6d 6d 61 74 69 6f 6e 2e .to.local.sites.of.inflammation.
41c0 80 80 54 68 65 cf 61 73 73 61 79 80 64 65 73 63 72 69 62 65 64 80 62 65 6c 6f 77 80 6d 65 61 73 ..The.assay.described.below.meas
41e0 75 72 65 73 80 74 68 65 80 72 61 64 69 61 6c 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 6d 6f 6e ures.the.radial.migration.of.mon
4200 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 75 6e 64 65 72 80 61 67 61 72 ocytes.or.neutrophils.under.agar
4220 6f 73 65 cf 69 6e 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 80 74 6f 80 61 80 63 68 65 6d 6f 74 61 63 74 69 63 ose.in.response.to.a.chemotactic
4240 80 67 72 61 64 69 65 6e 74 80 63 72 65 61 74 65 64 80 62 79 80 74 68 65 80 64 69 66 66 75 73 69 .gradient.created.by.the.diffusi
4260 6f 6e 80 6f 66 80 61 80 63 68 65 6d 6f 61 74 74 72 61 63 74 61 6e 74 80 74 68 72 6f 75 67 68 80 on.of.a.chemoattractant.through.
4280 74 68 65 cf 61 67 61 72 6f 73 65 2e 80 80 41 66 74 65 72 80 61 6c 6c 6f 77 69 6e 67 80 66 6f 72 the.agarose...After.allowing.for
42a0 80 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 74 6f 77 61 72 64 80 74 68 65 80 63 .directed.migration.toward.the.c
42c0 68 65 6d 6f 61 74 74 72 61 63 74 61 6e 74 80 69 6e 80 6f 6e 65 80 64 69 72 65 63 74 69 6f 6e 80 hemoattractant.in.one.direction.
42e0 61 6e 64 cf 72 61 6e 64 6f 6d 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 69 6e 80 74 68 65 80 6f 70 70 6f and.random.migration.in.the.oppo
4300 73 69 74 65 80 64 69 72 65 63 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 61 70 70 6c 69 65 64 80 63 68 65 6d 6f 61 site.direction.of.applied.chemoa
4320 74 74 72 61 63 74 61 6e 74 2c 80 74 68 65 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 cf 6e 65 75 74 ttractant,.the.monocytes.or.neut
4340 72 6f 70 68 69 6c 73 80 61 72 65 80 66 69 78 65 64 80 61 6e 64 80 73 74 61 69 6e 65 64 80 77 69 rophils.are.fixed.and.stained.wi
4360 74 68 80 47 69 65 6d 73 61 80 73 74 61 69 6e 2e 80 80 41 66 74 65 72 80 64 72 79 69 6e 67 2c 80 th.Giemsa.stain...After.drying,.
4380 74 68 65 80 64 69 73 74 61 6e 63 65 80 6f 66 80 64 69 72 65 63 74 65 64 cf 6d 69 67 72 61 74 69 the.distance.of.directed.migrati
43a0 6f 6e 80 61 6e 64 80 72 61 6e 64 6f 6d 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 66 69 78 65 64 on.and.random.migration.of.fixed
43c0 80 61 6e 64 80 73 74 61 69 6e 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 69 73 80 64 65 74 65 72 .and.stained.phagocytes.is.deter
43e0 6d 69 6e 65 64 80 62 79 cf 6d 69 63 72 6f 70 72 6f 6a 65 63 74 69 6f 6e 80 28 34 30 25 29 80 6e mined.by.microprojection.(40%).n
4400 65 74 80 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 69 73 80 64 65 74 65 72 6d 69 et.directed.migration.is.determi
4420 6e 65 64 80 62 79 80 74 68 65 80 73 75 62 74 72 61 63 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 72 61 6e 64 6f 6d ned.by.the.subtraction.of.random
4440 cf 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 64 69 73 74 61 6e 63 65 80 28 69 6e 80 63 65 6e 74 69 6d 65 74 .migration.distance.(in.centimet
4460 65 72 73 29 80 66 72 6f 6d 80 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 74 6f 77 ers).from.directed.migration.tow
4480 61 72 64 80 74 68 65 80 63 68 65 6d 6f 61 74 74 72 61 63 74 61 6e 74 2e 80 80 50 61 74 69 65 6e ard.the.chemoattractant...Patien
44a0 74 cf 76 61 6c 75 65 73 80 61 72 65 80 74 68 65 6e 80 63 6f 6d 70 61 72 65 64 80 77 69 74 68 80 t.values.are.then.compared.with.
44c0 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 76 61 6c 75 65 73 80 6f 62 74 61 69 6e 65 64 80 77 69 74 68 80 63 6f 6e control.values.obtained.with.con
44e0 74 72 6f 6c 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 65 76 61 6c 75 61 74 65 64 80 69 6e cf 70 61 72 trol.phagocytes.evaluated.in.par
4500 61 6c 6c 65 6c 80 77 69 74 68 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 2e cc cc allel.with.patient.phagocytes...
4520 f2 0c f2 53 70 65 63 69 6d 65 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 d0 11 20 0d 0e 00 01 20 ...Specimen.....................
4540 15 00 d0 cc 48 65 70 61 72 69 6e 69 7a 65 64 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 69 73 80 63 ....Heparinized.whole.blood.is.c
4560 6f 6c 6c 65 63 74 65 64 80 66 72 6f 6d 80 74 68 65 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 61 6e 64 80 61 80 ollected.from.the.patient.and.a.
4580 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 73 75 62 6a 65 63 74 80 61 73 80 64 65 73 63 72 69 62 65 64 80 61 62 6f control.subject.as.described.abo
45a0 76 65 cf 66 6f 72 80 74 68 65 80 69 73 6f 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 ve.for.the.isolation.of.monocyte
45c0 73 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 2e 80 80 54 68 65 80 73 70 65 63 69 6d 65 6e s.and.neutrophils...The.specimen
45e0 73 80 73 68 6f 75 6c 64 80 62 65 80 6d 61 69 6e 82 74 61 69 6e 65 64 80 61 74 80 72 6f 6f 6d cf s.should.be.main.tained.at.room.
4600 74 65 6d 70 65 72 61 74 75 72 65 80 61 6e 64 80 70 72 6f 63 65 73 73 65 64 80 66 6f 72 80 65 76 temperature.and.processed.for.ev
4620 61 6c 75 61 74 69 6f 6e 80 77 69 74 68 69 6e 80 36 80 68 80 6f 66 80 63 6f 6c 6c 65 63 74 69 6f aluation.within.6.h.of.collectio
4640 6e 2e cc cc f2 0c f2 52 65 61 67 65 6e 74 73 80 61 6e 64 80 53 75 70 70 6c 69 65 73 f3 0c f3 d0 n......Reagents.and.Supplies....
4660 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 70 17 c0 12 14 00 01 20 15 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 .........p............0.........
4680 e0 41 67 61 72 6f 73 65 2c 80 74 79 70 65 80 48 53 41 80 28 48 79 6d 61 6e 80 53 65 72 75 6d 80 .Agarose,.type.HSA.(Hyman.Serum.
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46c0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 30 80 58 80 45 61 67 6c 65 80 6d 69 6e 69 6d 75 6d 80 65 73 0..........10.X.Eagle.minimum.es
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5840 6b 80 6f 72 80 73 70 61 74 75 6c 61 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 k.or.spatula...........`.(#`.(#.
5860 20 17 00 d0 d0 06 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 ...............,`'*.......0.....
5880 08 07 0c 00 e0 31 33 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 41 6c 6c 6f .....13..0.....`...(#..(#...Allo
58a0 77 80 74 68 65 80 70 6c 61 74 65 73 80 74 6f 80 61 69 72 80 64 72 79 2c 80 61 6e 64 80 73 74 61 w.the.plates.to.air.dry,.and.sta
58c0 69 6e 80 74 68 65 80 61 64 68 65 72 65 6e 74 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 62 79 80 74 68 in.the.adherent.phagocytes.by.th
58e0 65 80 61 64 64 69 74 69 6f 6e 80 6f 66 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 00 00 00 00 01 20 15 e.addition.of...................
5900 00 d0 31 2e 35 80 6d 6c 80 6f 66 80 47 69 65 6d 73 61 80 73 74 61 69 6e 2e 80 80 49 6e 63 75 62 ..1.5.ml.of.Giemsa.stain...Incub
5920 61 74 65 80 66 6f 72 80 31 35 80 6d 69 6e 80 61 74 80 72 6f 6f 6d 80 74 65 6d 70 65 72 61 74 75 ate.for.15.min.at.room.temperatu
5940 72 65 2c 80 74 68 65 6e 80 72 69 6e 73 65 80 65 61 63 68 cf 70 6c 61 74 65 80 77 69 74 68 80 64 re,.then.rinse.each.plate.with.d
5960 48 f2 06 f2 32 f3 06 f3 30 80 61 6e 64 80 61 6c 6c 6f 77 80 74 6f 80 61 69 72 80 64 72 79 2e d0 H...2...0.and.allow.to.air.dry..
5980 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 90 06 e0 01 02 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 .................`.(#`.(#.......
59a0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 34 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 0..........14..0.....`...(#..(#.
59c0 00 e0 55 73 69 6e 67 80 61 80 70 72 6f 6a 65 63 74 69 6f 6e 80 6d 69 63 72 6f 73 63 6f 70 65 80 ..Using.a.projection.microscope.
59e0 28 34 30 78 29 2c 80 72 65 63 6f 72 64 80 74 68 65 80 64 69 73 74 61 6e 63 65 80 69 6e 80 63 65 (40x),.record.the.distance.in.ce
5a00 6e 74 69 6d 65 74 65 72 73 80 6f 66 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 70 08 c0 03 04 00 01 20 15 00 ntimeters.of..........p.........
5a20 d0 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 66 72 6f 6d 80 74 68 65 80 65 64 .phagocyte.migration.from.the.ed
5a40 67 65 80 6f 66 80 65 61 63 68 80 77 65 6c 6c 80 74 6f 80 74 68 65 80 6c 65 61 64 69 6e 67 80 65 ge.of.each.well.to.the.leading.e
5a60 64 67 65 80 6f 66 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 cf 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 74 6f 77 61 72 dge.of.phagocyte.migration.towar
5a80 64 80 77 65 6c 6c 73 80 63 6f 6e 74 61 69 6e 69 6e 67 80 63 68 65 6d 6f 61 74 74 72 61 63 74 61 d.wells.containing.chemoattracta
5aa0 6e 74 80 28 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 29 80 61 6e 64 cf 74 6f 77 61 nt.(directed.migration).and.towa
5ac0 72 64 80 77 65 6c 6c 73 80 63 6f 6e 74 61 69 6e 69 6e 67 80 50 42 53 80 28 72 61 6e 64 6f 6d 80 rd.wells.containing.PBS.(random.
5ae0 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 29 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 17 migration)...........`.(#`.(#...
5b00 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 31 35 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 ....0..........15..0.....`...(#.
5b20 07 28 23 14 00 e0 43 61 6c 63 75 6c 61 74 65 80 74 68 65 80 61 76 65 72 61 67 65 80 6e 65 74 80 .(#...Calculate.the.average.net.
5b40 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 66 6f 72 80 65 61 63 68 80 64 69 6c 75 directed.migration.for.each.dilu
5b60 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 46 4d 4c 50 80 61 73 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 20 0d 70 08 09 00 01 tion.of.FMLP.as............p....
5b80 20 15 00 d0 66 6f 6c 6c 6f 77 73 3a d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 ....follows:..........`.(#`.(#..
5ba0 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 .....0...........0.....`...(#..(
5bc0 23 14 00 e0 f0 24 08 f0 f2 0e f2 28 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 84 72 #....$.....(directed.migration.r
5be0 61 6e 64 6f 6d 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 29 f3 0e f3 d0 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 f0 0f 40 andom.migration)...............@
5c00 0b 0c 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 .....`.(#`.(#......0...........0
5c20 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 80 80 80 80 80 80 80 80 6e 75 6d 62 65 72 .....`...(#..(#...........number
5c40 80 6f 66 80 77 65 6c 6c 73 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 17 00 d0 .of.wells..........`.(#`.(#.....
5c60 cc 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 3d 80 ..............................=.
5c80 61 76 65 72 61 67 65 80 6e 65 74 80 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e cc cc average.net.directed.migration..
5ca0 f2 0c f2 49 6e 74 65 72 70 72 65 74 61 74 69 6f 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 a0 14 ...Interpretation...............
5cc0 f0 0f 11 00 01 20 15 00 d0 cc 54 68 65 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 72 65 73 75 6c 74 73 80 6f 66 ..........The.patient.results.of
5ce0 80 65 61 63 68 80 61 73 73 61 79 80 61 72 65 80 69 6e 74 65 72 70 72 65 74 65 64 80 72 65 6c 61 .each.assay.are.interpreted.rela
5d00 74 69 76 65 80 74 6f 80 74 68 65 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 72 65 73 75 6c 74 73 2e 80 80 4e 65 tive.to.the.control.results...Ne
5d20 74 80 64 69 72 65 63 74 65 64 cf 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 t.directed.migration.of.control.
5d40 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 73 68 6f 75 6c 64 80 72 61 6e 67 65 80 66 72 6f 6d 80 31 2e 35 phagocytes.should.range.from.1.5
5d60 80 63 6d 80 74 6f 80 34 2e 35 80 63 6d 2c 80 77 69 74 68 80 72 61 6e 64 6f 6d 80 6d 69 67 72 61 .cm.to.4.5.cm,.with.random.migra
5d80 74 69 6f 6e cf 72 61 6e 67 69 6e 67 80 66 72 6f 6d 80 30 2e 35 80 63 6d 80 74 6f 80 31 2e 35 80 tion.ranging.from.0.5.cm.to.1.5.
5da0 63 6d 2e 80 80 50 61 74 69 65 6e 74 80 76 61 6c 75 65 73 80 61 72 65 80 69 6e 74 65 72 70 72 65 cm...Patient.values.are.interpre
5dc0 74 65 64 80 61 73 80 65 69 74 68 65 72 80 63 6f 6d 70 61 72 61 62 6c 65 80 74 6f 80 6f 72 cf 64 ted.as.either.comparable.to.or.d
5de0 65 76 69 61 74 69 6e 67 80 66 72 6f 6d 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 76 61 6c 75 65 73 2e cc cc cc eviating.from.control.values....
5e00 f2 0c f2 4e 42 54 80 53 4c 49 44 45 80 41 53 53 41 59 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 20 ...NBT.SLIDE.ASSAY..............
5e20 1c 70 17 19 00 01 20 15 00 d0 cc f2 0c f2 50 72 69 6e 63 69 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b .p............Principle.........
5e40 00 09 00 01 00 1e 50 19 1b 00 01 20 15 00 d0 cc 41 6e 80 69 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 6d 69 63 ......P.........An.important.mic
5e60 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c 80 6d 65 63 68 61 6e 69 73 6d 73 80 6f 66 80 6e 6f 72 6d 61 6c 80 70 robicidal.mechanisms.of.normal.p
5e80 68 61 67 6f 82 63 79 74 65 73 80 69 73 80 74 68 65 69 72 80 61 62 69 6c 69 74 79 80 74 6f 80 67 hago.cytes.is.their.ability.to.g
5ea0 65 6e 63 6e 65 72 61 63 65 80 74 6f 78 69 63 cf 6f 78 79 67 65 6e 80 72 61 64 69 63 61 6c 73 80 encnerace.toxic.oxygen.radicals.
5ec0 75 70 6f 6e 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 6f 73 69 73 2c 6c 65 61 64 69 6e 67 80 64 69 72 65 63 74 upon.phagocytosis,leading.direct
5ee0 6c 79 80 6f 72 80 69 6e 64 69 72 65 63 74 6c 79 80 74 6f 80 62 61 63 74 65 72 69 61 6c 80 63 65 ly.or.indirectly.to.bacterial.ce
5f00 6c 6c 80 64 65 61 74 68 2e 80 80 4f 6e 65 80 6f 66 cf 74 68 65 80 6f 78 79 67 65 6e 80 72 61 64 ll.death...One.of.the.oxygen.rad
5f20 69 63 61 6c 73 2c 80 73 75 70 65 72 6f 78 69 64 65 80 28 30 f2 06 f2 32 f3 06 f3 f2 05 f2 84 f3 icals,.superoxide.(0...2........
5f40 05 f3 29 2c 80 69 73 80 65 61 73 69 6c 79 80 64 65 74 65 63 74 65 64 80 69 6e 80 73 74 69 6d 75 ..),.is.easily.detected.in.stimu
5f60 6c 61 74 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 62 79 80 74 68 65 80 72 65 64 75 63 74 69 6f lated.phagocytes.by.the.reductio
5f80 6e d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 c0 21 10 1d 1f 00 01 20 15 00 d0 6f 66 80 74 68 65 80 63 6f 6d n...........!.........of.the.com
5fa0 70 6f 75 6e 64 80 4e 42 54 80 74 6f 80 61 6e 80 69 6e 73 6f 6c 75 62 6c 65 80 66 6f 72 6d 80 28 pound.NBT.to.an.insoluble.form.(
5fc0 66 6f 72 6d 61 7a 61 6e 29 80 28 31 29 2e 80 80 46 6f 72 6d 61 7a 61 6e 80 69 73 80 6f 62 73 65 formazan).(1)...Formazan.is.obse
5fe0 72 76 65 64 80 62 79 80 6c 69 67 68 74 cf 6d 69 63 72 6f 73 63 6f 70 79 80 61 73 80 62 6c 75 65 rved.by.light.microscopy.as.blue
6000 80 67 72 61 6e 75 6c 65 73 80 69 6e 80 74 68 65 80 63 79 74 6f 70 6c 61 73 6d 80 6f 66 80 73 74 .granules.in.the.cytoplasm.of.st
6020 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 2e 80 80 54 68 65 80 61 6d 6f 75 6e 74 imulated.phagocytes...The.amount
6040 80 6f 66 cf 73 75 70 65 72 6f 78 69 64 65 80 70 72 6f 64 75 63 65 64 80 62 79 80 73 74 69 6d 75 .of.superoxide.produced.by.stimu
6060 6c 61 74 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 28 32 29 2e 80 80 50 68 61 67 6f 63 79 74 65 lated.phagocytes.(2)...Phagocyte
6080 73 80 64 65 66 69 63 69 65 6e 74 80 69 6e 80 6b 65 79 80 65 6e 7a 79 6d 65 73 80 6f 66 80 74 68 s.deficient.in.key.enzymes.of.th
60a0 65 cf 68 65 78 6f 73 65 80 6d 6f 6e 6f 70 68 6f 73 70 68 61 74 65 80 73 68 75 6e 74 80 61 72 65 e.hexose.monophosphate.shunt.are
60c0 80 69 6d 70 61 69 72 65 64 80 69 6e 80 74 68 65 69 72 80 61 62 69 6c 69 74 79 80 74 6f 80 67 65 .impaired.in.their.ability.to.ge
60e0 6e 65 72 61 74 65 80 73 75 70 65 72 6f 78 69 64 65 2c 80 77 68 69 63 68 80 69 73 cf 72 65 66 6c nerate.superoxide,.which.is.refl
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6120 4e 42 54 2e cc cc f2 0c f2 53 70 65 63 69 6d 65 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 50 28 NBT......Specimen.............P(
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6ee0 d0 64 61 72 6b 80 62 6c 75 65 80 64 65 70 6f 73 69 74 73 80 6f 66 80 a2 66 6f 72 6d 61 7a 61 6e .dark.blue.deposits.of..formazan
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71c0 64 69 73 65 61 73 65 80 77 69 6c 6c 80 75 73 75 61 6c 6c 79 80 70 72 6f 64 75 63 65 80 31 30 30 disease.will.usually.produce.100
71e0 25 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 2c 80 77 69 74 68 80 61 80 6d 61 72 6b 65 64 80 %.positive.cells,.with.a.marked.
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7240 6c 61 73 6d 80 6f 66 80 65 61 63 68 80 63 65 6c 6c 73 80 77 68 69 63 68 80 63 61 6e 80 6f 66 74 lasm.of.each.cells.which.can.oft
7260 65 6e 80 6c 65 61 64 80 74 6f 80 6d 69 73 73 65 64 cf 64 69 61 67 6e 6f 73 65 73 2e 80 80 54 68 en.lead.to.missed.diagnoses...Th
7280 65 80 68 65 74 65 72 6f 7a 79 67 6f 75 73 80 63 61 72 72 69 65 72 73 80 6f 66 80 74 68 65 80 61 e.heterozygous.carriers.of.the.a
72a0 75 74 6f 73 6f 6d 61 6c 80 72 65 63 65 73 73 69 76 65 80 69 6e 68 65 72 69 74 65 64 80 64 69 73 utosomal.recessive.inherited.dis
72c0 65 61 73 65 73 80 61 72 65 cf 69 6e 64 69 73 74 69 6e 67 75 69 73 68 61 62 6c 65 80 66 72 6f 6d eases.are.indistinguishable.from
72e0 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 73 75 62 6a 65 63 74 73 2e f1 01 05 00 f1 9b cc cc cc f2 0c f2 a2 44 .control.subjects..............D
7300 43 46 a3 80 41 53 53 41 59 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 a0 14 f0 0f 11 00 01 20 15 00 CF..ASSAY.......................
7320 d0 cc f2 0c f2 50 72 69 6e 63 69 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 16 d0 11 13 .....Principle..................
7340 00 01 20 15 00 d0 cc 48 79 64 72 6f 67 65 6e 80 70 65 72 6f 78 69 64 65 80 69 73 80 61 6e 80 69 .......Hydrogen.peroxide.is.an.i
7360 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 a2 6d 69 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c a3 80 62 79 80 70 72 6f 64 75 mportant..microbicidal..by.produ
7380 63 74 80 6f 66 80 74 68 65 80 6f 78 69 64 61 74 69 76 65 80 62 75 72 73 74 80 6f 66 80 73 74 69 ct.of.the.oxidative.burst.of.sti
73a0 6d 75 6c 61 74 65 64 cf 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 2e 80 80 54 68 69 73 80 63 6f 6d 70 6f 75 mulated.phagocytes...This.compou
73c0 6e 64 80 69 73 80 64 65 72 69 76 65 64 80 66 72 6f 6d 80 74 68 65 80 a2 64 69 73 6d 75 74 61 74 nd.is.derived.from.the..dismutat
73e0 69 6f 6e a3 80 6f 66 80 a2 73 75 70 65 72 6f 78 69 64 65 a3 80 70 72 6f 64 75 63 65 64 80 62 79 ion..of..superoxide..produced.by
7400 80 74 68 65 cf a2 68 65 78 6f 73 65 a3 80 a2 6d 6f 6e 6f 70 68 6f 73 70 68 61 74 65 a3 80 73 68 .the..hexose...monophosphate..sh
7420 75 6e 74 2e 80 80 48 79 64 72 6f 67 65 6e 80 70 65 72 82 6f 78 69 64 65 80 63 61 6e 80 62 65 80 unt...Hydrogen.per.oxide.can.be.
7440 6d 65 61 73 75 72 65 64 80 62 79 80 74 68 65 80 6f 78 69 64 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 74 68 65 measured.by.the.oxidation.of.the
7460 cf a2 6e 6f 6e 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 74 a3 80 63 6f 6d 70 6f 75 6e 64 80 32 27 2c 37 27 ..nonfluorescent..compound.2',7'
7480 80 84 a2 64 69 63 68 6c 6f 72 6f 66 6c 75 6f 72 65 73 63 69 6e a3 80 28 a2 44 43 46 48 a3 29 80 ...dichlorofluorescin..(.DCFH.).
74a0 74 6f 80 74 68 65 80 66 6c 6f 75 72 65 73 63 65 6e 74 80 63 6f 6d 70 6f 75 6e 64 80 32 27 2c 37 to.the.flourescent.compound.2',7
74c0 27 80 84 bc a2 64 69 63 68 6c 6f 72 6f 66 6c 75 6f 72 65 73 63 69 6e a3 80 28 a2 44 43 46 a3 29 '....dichlorofluorescin..(.DCF.)
74e0 2e 80 80 54 68 65 80 a2 6e 6f 6e 70 6f 6c 61 72 a3 80 61 6e 64 80 a2 6e 6f 6e 66 6c 75 6f 72 65 ...The..nonpolar..and..nonfluore
7500 73 63 65 6e 74 a3 80 66 6f 72 6d 80 6f 66 80 a2 44 43 46 48 a3 80 69 73 80 32 27 2c 37 27 80 84 scent..form.of..DCFH..is.2',7'..
7520 bc a2 64 69 63 68 6c 6f 72 6f 66 6c 75 6f 72 65 73 63 69 6e a3 80 a2 64 69 61 63 65 74 61 74 65 ..dichlorofluorescin...diacetate
7540 a3 80 28 a2 44 43 46 48 a3 84 44 41 29 2e 80 80 a2 44 43 46 48 a3 84 44 41 80 72 65 61 64 69 6c ..(.DCFH..DA)....DCFH..DA.readil
7560 79 80 64 69 66 66 75 73 65 73 80 61 63 72 6f 73 73 80 74 68 65 80 63 79 74 6f 70 6c 61 73 6d 69 y.diffuses.across.the.cytoplasmi
7580 63 cf 6d 65 6d 62 72 61 6e 65 80 6f 66 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 69 73 80 c.membrane.of.phagocytes.and.is.
75a0 74 72 61 70 70 65 64 80 69 6e 73 69 64 65 80 74 68 65 80 63 65 6c 6c 80 62 79 80 63 6c 65 61 76 trapped.inside.the.cell.by.cleav
75c0 61 67 65 80 6f 66 80 74 68 65 80 61 63 65 74 79 6c 80 67 72 6f 75 70 73 80 62 79 cf 63 79 74 6f age.of.the.acetyl.groups.by.cyto
75e0 70 6c 61 73 6d 69 63 80 65 6e 7a 79 6d 65 73 80 74 6f 80 74 68 65 80 a2 6e 6f 6e 66 6c 75 6f 72 plasmic.enzymes.to.the..nonfluor
7600 65 73 63 65 6e 74 a3 2c 80 a2 69 6f 6e 69 63 61 6c 6c 79 a3 80 63 68 61 72 67 65 64 80 a2 44 43 escent.,..ionically..charged..DC
7620 46 48 a3 2e 80 80 53 74 69 6d 75 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 74 68 65 cf 6f 78 69 64 61 74 69 FH....Stimulation.of.the.oxidati
7640 76 65 80 62 75 72 73 74 80 6f 66 80 a2 44 43 46 48 a3 84 6c 61 62 65 6c 65 64 80 70 68 61 67 6f ve.burst.of..DCFH..labeled.phago
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7680 80 66 6c 6f 77 80 a2 63 79 74 6f 6d 65 74 72 79 a3 80 28 33 29 2e 80 80 54 68 65 cf 61 64 76 61 .flow..cytometry..(3)...The.adva
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7760 2c 80 65 78 74 72 65 6d 65 6c 79 cf 73 6d 61 6c 6c 80 76 6f 6c 75 6d 65 73 80 6f 66 80 77 68 6f ,.extremely.small.volumes.of.who
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77c0 73 73 61 79 80 77 65 6c 6c cf 73 75 69 74 65 64 80 66 6f 72 80 69 6e 66 61 6e 74 73 80 61 6e 64 ssay.well.suited.for.infants.and
77e0 80 70 65 64 69 61 74 72 69 63 80 70 61 74 69 65 6e 74 73 2e cc d4 27 13 00 01 02 00 b0 04 03 d0 .pediatric.patients...'.........
7800 20 9b 70 00 00 13 00 d4 cc f2 0c f2 53 70 65 63 69 6d 65 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 ..p.........Specimen............
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7960 06 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 ..........,`'*.......0..........
7980 52 42 43 80 a2 6c 79 73 69 6e 67 a3 80 62 75 66 66 65 72 2e 80 84 38 2e 32 36 80 67 80 6f 66 80 RBC..lysing..buffer...8.26.g.of.
79a0 a2 4e 48 f2 06 f2 34 f3 06 f3 43 6c a3 2c 80 31 2e 30 80 67 80 6f 66 80 a2 4b 48 43 4f f2 06 f2 .NH...4...Cl.,.1.0.g.of..KHCO...
79c0 33 a3 f3 06 f3 2c 80 30 2e 30 33 37 80 67 80 6f 66 80 28 74 65 74 72 61 73 6f 64 69 75 6d 29 d0 3....,.0.037.g.of.(tetrasodium).
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7a00 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 a2 45 ...........0.....`...(#..(#....E
7a20 44 54 41 a3 80 69 6e 80 31 80 6c 69 74 65 72 80 6f 66 80 64 69 73 74 69 6c 6c 65 64 80 77 61 74 DTA..in.1.liter.of.distilled.wat
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7a80 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 a2 44 43 46 48 a3 84 44 41 80 #`.(#......0...........DCFH..DA.
7aa0 28 4d 6f 6c 65 63 75 6c 61 72 80 50 72 6f 62 65 73 2c 80 49 6e 63 2e 2c 80 45 75 67 65 6e 65 2c (Molecular.Probes,.Inc.,.Eugene,
7ac0 80 a2 4f 72 65 67 a3 2e 29 3a 80 31 30 80 a2 6d 4d a3 80 73 74 6f 63 6b 80 70 72 65 70 61 72 65 ..Oreg..):.10..mM..stock.prepare
7ae0 64 80 69 6e 80 61 62 73 6f 6c 75 74 65 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 08 07 28 23 08 07 28 23 02 d.in.absolute............(#..(#.
7b00 20 17 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 .....0...........0.....`...(#..(
7b20 23 14 00 e0 65 74 68 61 6e 6f 6c 80 61 6e 64 80 73 74 6f 72 65 64 80 61 74 80 84 32 30 f0 24 06 #...ethanol.and.stored.at..20.$.
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7b60 00 d0 e0 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 43 61 74 61 6c 61 73 65 80 66 72 6f 6d 80 62 6f 76 69 ...0..........Catalase.from.bovi
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7bc0 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 53 69 67 6d 61 80 43 .....0.....`...(#..(#...(Sigma.C
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8460 e0 31 31 2e e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 .11..0.....`...(#..(#...Evaluate
8480 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 66 6f 72 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 62 79 80 66 6c 6f .samples.for.fluorescence.by.flo
84a0 77 80 a2 63 79 74 6f 6d 65 74 72 79 a3 80 61 73 80 66 6f 6c 6c 6f 77 73 3a d0 04 1f 00 00 15 00 w..cytometry..as.follows:.......
84c0 13 00 01 30 2a 80 25 28 00 01 02 60 09 28 23 60 09 28 23 02 20 1f 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 ...0*.%(...`.(#`.(#.......0.....
84e0 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 a2 69 a3 29 e0 30 ......0.....`...(#..(#...(.i.).0
8500 14 00 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 55 73 65 80 61 80 73 74 61 6e 64 61 72 64 .......`.(#`.(#...Use.a.standard
8520 80 70 72 6f 74 6f 63 6f 6c 80 66 6f 72 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 73 61 6d 70 6c 65 .protocol.for.whole.blood.sample
8540 73 80 61 6e 64 80 6f 6e 65 84 70 61 72 61 6d 65 74 65 72 d0 03 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 s.and.one.parameter...........,`
8560 27 2a 00 01 20 15 00 d0 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 68 69 73 74 6f 67 72 61 6d 80 61 '*......fluorescence.histogram.a
8580 63 71 75 69 73 69 82 74 69 6f 6e 2c 80 61 63 63 75 6d 75 6c 61 74 69 6e 67 80 35 2c 30 30 30 80 cquisi.tion,.accumulating.5,000.
85a0 65 76 65 6e 74 73 80 6f 6e 80 65 69 74 68 65 72 cf 67 61 74 65 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 events.on.either.gated.neutrophi
85c0 6c 73 80 6f 72 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 80 62 6f 74 68 2e 80 80 47 61 74 69 6e 67 ls.or.monocytes.or.both...Gating
85e0 80 6f 6e 80 6c 79 6d 70 68 6f 63 79 74 65 73 80 77 69 6c 6c 80 61 6c 73 6f cf 61 6c 6c 6f 77 80 .on.lymphocytes.will.also.allow.
8600 74 68 65 80 6d 6f 6e 69 74 6f 72 69 6e 67 80 6f 66 80 61 6e 79 80 70 6f 73 73 69 62 6c 65 80 65 the.monitoring.of.any.possible.e
8620 78 74 72 61 63 65 6c 6c 75 6c 61 72 80 63 72 6f 73 73 84 66 65 65 64 69 6e 67 80 6f 66 80 63 65 xtracellular.cross.feeding.of.ce
8640 6c 6c 73 cf 77 69 74 68 80 68 79 64 72 6f 67 65 6e 80 70 65 72 6f 78 69 64 65 80 70 72 6f 64 75 lls.with.hydrogen.peroxide.produ
8660 63 65 64 80 62 79 80 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 74 68 61 ced.by.stimulated.phagocytes.tha
8680 74 80 77 65 72 65 80 6e 6f 74 cf 64 65 67 72 61 64 65 64 80 62 79 80 63 61 74 61 6c 61 73 65 2e t.were.not.degraded.by.catalase.
86a0 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 b8 0b 28 23 b8 0b 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 08 ............(#..(#.......0......
86c0 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 69 69 29 e0 30 14 00 .....0.....`...(#..(#...(ii).0..
86e0 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 80 74 68 65 80 63 6f 6e .....`.(#`.(#...Evaluate.the.con
8700 74 72 6f 6c 80 72 65 73 74 69 6e 67 80 73 61 6d 70 6c 65 80 66 69 72 73 74 80 61 6e 64 80 73 65 trol.resting.sample.first.and.se
8720 74 80 74 68 65 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 63 75 72 73 6f 72 80 74 6f d0 01 15 00 t.the.fluorescence.cursor.to....
8740 00 0b 00 09 00 01 50 0a a0 05 06 00 01 20 15 00 d0 6c 65 73 73 80 74 68 61 6e 80 32 25 80 70 6f ......P..........less.than.2%.po
8760 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 2e 80 80 54 68 69 73 80 63 75 72 73 6f 72 80 73 65 74 74 69 sitive.cells...This.cursor.setti
8780 6e 67 80 73 68 6f 75 6c 64 80 62 65 80 75 73 65 64 80 66 6f 72 80 74 68 65 cf 65 76 61 6c 75 61 ng.should.be.used.for.the.evalua
87a0 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 61 6c 6c 80 72 65 6d 61 69 6e 69 6e 67 80 73 61 6d 70 6c 65 73 2e 80 80 tion.of.all.remaining.samples...
87c0 41 6c 73 6f 2c 80 74 68 65 80 a2 70 68 6f 74 6f 6d 75 6c 74 69 70 6c 69 65 72 a3 80 74 75 62 65 Also,.the..photomultiplier..tube
87e0 80 75 73 65 64 cf 66 6f 72 80 74 68 65 80 63 6f 6c 6c 65 63 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 66 6c 75 6f .used.for.the.collection.of.fluo
8800 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 73 69 67 6e 61 6c 73 80 73 68 6f 75 6c 64 80 62 65 80 61 64 6a 75 73 rescence.signals.should.be.adjus
8820 74 65 64 80 73 6f 80 74 68 61 74 80 73 69 67 6e 61 6c 73 cf 6f 62 74 61 69 6e 65 64 80 77 69 74 ted.so.that.signals.obtained.wit
8840 68 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 72 65 73 74 69 6e 67 80 a2 50 4d 4e a3 80 61 70 70 65 61 72 80 61 h.control.resting..PMN..appear.a
8860 73 80 61 80 a2 47 61 75 73 73 69 61 6e a3 80 64 69 73 74 72 69 62 75 82 74 69 6f 6e 80 6f 66 cf s.a..Gaussian..distribu.tion.of.
8880 73 69 67 6e 61 6c 73 80 77 69 74 68 69 6e 80 74 68 65 80 66 69 72 73 74 80 64 65 63 61 64 65 80 signals.within.the.first.decade.
88a0 28 30 2e 31 84 31 2e 30 29 80 6f 66 80 61 80 33 84 80 6f 72 80 34 84 6c 6f 67 80 73 63 61 6c 65 (0.1.1.0).of.a.3..or.4.log.scale
88c0 2e 80 80 54 68 69 73 80 77 69 6c 6c cf 75 73 75 61 6c 6c 79 80 70 6c 61 63 65 80 74 68 65 80 66 ...This.will.usually.place.the.f
88e0 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 68 69 73 74 6f 67 72 61 6d 80 6f 66 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c luorescence.histogram.of.control
8900 84 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 a2 50 4d 4e a3 cf 77 69 74 68 69 6e 80 74 68 65 80 74 68 69 .stimulated..PMN..within.the.thi
8920 72 64 80 64 65 63 61 64 65 80 6f 66 80 74 68 65 80 6c 6f 67 80 73 63 61 6c 65 2c 80 77 68 69 63 rd.decade.of.the.log.scale,.whic
8940 68 80 69 73 80 70 61 72 74 69 63 75 6c 61 72 6c 79 80 69 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 66 6f 72 cf h.is.particularly.important.for.
8960 74 68 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 68 65 74 65 72 6f 7a 79 67 6f 75 73 80 63 the.evaluation.of.heterozygous.c
8980 61 72 72 69 65 72 73 80 6f 66 80 74 68 65 80 58 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 66 6f 72 6d 80 6f 66 80 arriers.of.the.X.linked.form.of.
89a0 a2 43 47 44 a3 80 69 6e cf 77 68 69 63 68 80 74 77 6f 80 64 69 73 74 69 6e 63 74 80 66 6c 75 6f .CGD..in.which.two.distinct.fluo
89c0 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 64 69 73 74 72 69 62 75 74 69 6f 6e 73 80 61 72 65 80 6f 62 73 65 72 rescence.distributions.are.obser
89e0 76 65 64 2c 80 6f 6e 65 80 61 70 70 65 61 72 69 6e 67 cf 69 6e 80 74 68 65 80 6e 65 67 61 74 69 ved,.one.appearing.in.the.negati
8a00 76 65 80 72 65 67 69 6f 6e 80 61 6e 64 80 6f 6e 65 80 69 6e 80 74 68 65 80 70 6f 73 69 74 69 76 ve.region.and.one.in.the.positiv
8a20 65 80 72 65 67 69 6f 6e 80 6f 66 80 74 68 65 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 cf 68 69 73 e.region.of.the.fluorescence.his
8a40 74 6f 67 72 61 6d 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 b8 0b 28 23 b8 0b 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 togram.............(#..(#.......
8a60 30 0c 00 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 0...........0.....`...(#..(#...(
8a80 69 69 69 29 e0 30 14 00 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 iii).0.......`.(#`.(#...Evaluate
8aa0 80 74 68 65 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 73 61 6d 70 6c 65 2c 80 .the.control.stimulated.sample,.
8ac0 77 68 69 63 68 80 73 68 6f 75 6c 64 80 62 65 80 67 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 which.should.be.greater.than.95%
8ae0 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 16 d0 11 13 00 01 20 15 00 d0 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 .....................positive.ce
8b00 6c 6c 73 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 b8 0b 28 23 b8 0b 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 lls.............(#..(#.......0..
8b20 00 00 00 08 07 0c 00 e0 e0 30 14 00 00 00 00 60 09 08 07 28 23 08 07 28 23 14 00 e0 28 69 76 29 .........0.....`...(#..(#...(iv)
8b40 e0 30 14 00 00 00 00 b8 0b 60 09 28 23 60 09 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 80 70 61 74 .0.......`.(#`.(#...Evaluate.pat
8b60 69 65 6e 74 80 72 65 73 74 69 6e 67 80 61 6e 64 80 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 73 61 6d 70 ient.resting.and.stimulated.samp
8b80 6c 65 73 80 61 72 65 80 72 65 63 6f 72 64 80 74 68 65 80 70 65 72 63 65 6e 74 61 67 65 d0 01 15 les.are.record.the.percentage...
8ba0 00 00 0b 00 09 00 01 50 19 a0 14 16 00 01 20 15 00 d0 6f 66 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 .......P..........of.positive.ce
8bc0 6c 6c 73 2e 80 80 54 68 65 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 lls...The.mean.channel.fluoresce
8be0 6e 63 65 80 6f 66 80 74 68 65 80 a2 66 6c 75 6f 72 63 73 72 65 6e 63 65 a3 cf 68 69 73 74 6f 67 nce.of.the..fluorcsrence..histog
8c00 72 61 6d 80 73 68 6f 75 6c 64 80 61 6c 73 6f 80 62 65 80 72 65 63 6f 72 64 65 64 80 66 6f 72 80 ram.should.also.be.recorded.for.
8c20 61 6c 6c 80 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 73 61 6d 70 6c 65 73 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 all.stimulated.samples..........
8c40 02 b8 0b 28 23 b8 0b 28 23 02 20 17 00 d0 d3 04 21 00 00 0d 00 01 b0 04 03 00 90 06 00 70 08 00 ...(#..(#.......!............p..
8c60 60 09 00 ff ff 02 00 00 00 9c 58 02 21 00 d3 d4 26 0c 00 01 02 00 a0 05 0c 00 d4 cc f2 0c f2 49 `.........X.!...&..............I
8c80 6e 74 65 72 70 72 65 74 61 74 69 6f 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 1d 60 18 1a 00 nterpretation...............`...
8ca0 01 20 15 00 d0 cc a2 50 4d 41 a3 84 73 74 69 6d 75 6c 61 74 65 64 80 a2 50 4d 4e a3 80 6f 62 74 .......PMA..stimulated..PMN..obt
8cc0 61 69 6e 65 64 80 66 72 6f 6d 80 6e 6f 72 6d 61 6c 80 73 75 62 6a 65 63 74 73 80 79 69 65 6c 64 ained.from.normal.subjects.yield
8ce0 80 61 74 80 6c 65 61 73 74 80 39 35 25 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 80 77 69 74 .at.least.95%.positive.cells.wit
8d00 68 80 68 69 67 68 cf 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 h.high.mean.channel.fluorescence
8d20 80 76 61 6c 75 65 73 80 77 69 74 68 69 6e 80 74 68 65 80 74 68 69 72 64 80 64 65 63 61 64 65 80 .values.within.the.third.decade.
8d40 6f 66 80 61 80 66 6f 75 72 84 64 65 63 61 64 65 80 73 63 61 6c 65 2c 80 69 6e 64 69 63 61 74 69 of.a.four.decade.scale,.indicati
8d60 6e 67 80 68 69 67 68 cf 6c 65 76 65 6c 73 80 6f 66 80 68 79 64 72 6f 67 65 6e 80 70 65 72 6f 78 ng.high.levels.of.hydrogen.perox
8d80 69 64 65 80 70 72 6f 64 75 63 74 69 6f 6e 2e 80 f1 00 06 00 f1 80 50 61 74 69 65 6e 74 73 80 77 ide.production........Patients.w
8da0 69 74 68 80 74 68 65 80 58 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 66 6f 72 6d 80 6f 66 80 f1 01 06 00 f1 d4 27 ith.the.X.linked.form.of.......'
8dc0 13 00 01 02 00 a0 05 03 20 1c 19 86 00 00 13 00 d4 f1 00 06 00 f1 a2 43 47 44 a3 80 74 79 70 69 .......................CGD..typi
8de0 63 61 6c 6c 79 80 67 69 76 65 cf 62 65 74 77 65 65 6e 80 30 80 61 6e 64 80 38 38 25 80 70 6f 73 cally.give.between.0.and.88%.pos
8e00 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 2e 80 80 48 6f 77 65 76 65 72 2c 80 74 68 65 80 6d 65 61 6e 80 itive.cells...However,.the.mean.
8e20 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 76 61 6c 75 65 80 66 6f 72 80 74 channel.fluorescence.value.for.t
8e40 68 65 cf 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 68 69 73 74 6f 67 72 61 6d 80 69 73 80 61 6c 77 he.fluorescence.histogram.is.alw
8e60 61 79 73 80 6d 61 72 6b 65 64 6c 79 80 72 65 64 75 63 65 64 80 61 73 80 63 6f 6d 70 61 72 65 64 ays.markedly.reduced.as.compared
8e80 80 77 69 74 68 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 cf 68 69 73 74 6f .with.control.fluorescence.histo
8ea0 67 72 61 6d 73 2e 80 80 41 75 74 6f 73 6f 6d 61 6c 80 72 65 63 65 73 73 69 76 65 80 66 6f 72 6d grams...Autosomal.recessive.form
8ec0 73 80 6f 66 80 74 68 65 80 64 69 73 65 61 73 65 80 74 79 70 69 63 61 6c 6c 79 80 79 69 65 6c 64 s.of.the.disease.typically.yield
8ee0 80 67 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 cf 63 65 6c 6c 73 .greater.than.95%.positive.cells
8f00 80 62 75 74 80 77 69 74 68 80 72 65 64 75 63 65 64 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 .but.with.reduced.mean.channel.f
8f20 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 76 61 6c 75 65 73 2e 80 80 54 68 65 72 65 66 6f 72 65 2c 80 luorescence.values...Therefore,.
8f40 69 6e 80 72 65 70 6f 72 74 69 6e 67 80 72 65 73 75 6c 74 73 80 66 72 6f 6d cf 74 68 69 73 80 61 in.reporting.results.from.this.a
8f60 73 73 61 79 2c 80 69 74 80 69 73 80 69 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 74 6f 80 69 6e 63 6c 75 64 65 ssay,.it.is.important.to.include
8f80 80 62 6f 74 68 80 70 65 72 63 65 6e 74 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 80 61 6e 64 .both.percent.positive.cells.and
8fa0 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 cf 76 61 6c 75 65 .mean.channel.fluorescence.value
8fc0 73 2e 80 80 54 68 65 80 76 61 72 69 61 62 69 6c 69 74 79 80 6f 62 73 65 72 76 65 64 80 77 69 74 s...The.variability.observed.wit
8fe0 68 80 74 68 65 80 a2 44 43 46 a3 80 61 73 73 61 79 80 69 6e 80 74 68 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 h.the..DCF..assay.in.the.evaluat
9000 69 6f 6e 80 6f 66 80 58 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 a2 43 47 44 a3 80 69 73 cf 72 65 66 6c 65 63 74 ion.of.X.linked..CGD..is.reflect
9020 65 64 80 69 6e 80 74 68 65 80 6f 62 73 65 72 76 65 64 80 67 65 6e 65 74 69 63 80 76 61 72 69 61 ed.in.the.observed.genetic.varia
9040 62 69 6c 69 74 79 80 6f 66 80 74 68 65 80 64 69 73 65 61 73 65 80 69 6e 80 74 65 72 6d 73 80 6f bility.of.the.disease.in.terms.o
9060 66 80 74 68 65 80 a2 4e 41 44 50 48 a3 80 a2 6f 78 69 64 61 73 65 a3 80 67 65 6e 65 cf 73 74 72 f.the..NADPH...oxidase..gene.str
9080 75 63 74 75 72 65 2c 80 a2 6f 78 69 64 61 73 65 a3 80 61 63 74 69 76 69 74 79 2c 80 61 6e 64 80 ucture,..oxidase..activity,.and.
90a0 63 6c 69 6e 69 63 61 6c 80 70 72 65 73 65 6e 74 61 74 69 6f 6e 2e 80 80 46 69 67 75 72 65 80 31 clinical.presentation...Figure.1
90c0 80 69 6c 6c 75 73 74 72 61 74 65 73 80 74 68 65 80 61 70 70 6c 69 63 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 .illustrates.the.application.of.
90e0 74 68 65 cf a2 44 43 46 a3 80 61 73 73 61 79 80 69 6e 80 74 68 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6f the..DCF..assay.in.the.evaluatio
9100 6e 80 6f 66 80 a2 50 4d 4e a3 80 66 72 6f 6d 80 61 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 77 69 74 68 80 58 n.of..PMN..from.a.patient.with.X
9120 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 a2 43 47 44 a3 80 70 6f 73 74 80 62 6f 6e 65 80 6d 61 72 72 6f 77 cf 74 .linked..CGD..post.bone.marrow.t
9140 72 61 6e 73 70 6c 61 6e 74 80 28 36 80 79 65 61 72 73 29 80 61 6e 64 80 68 69 73 80 68 65 74 65 ransplant.(6.years).and.his.hete
9160 72 6f 7a 79 67 6f 75 73 80 63 61 72 72 69 65 72 80 6d 6f 74 68 65 72 2e 80 80 49 6e 80 65 61 63 rozygous.carrier.mother...In.eac
9180 68 80 63 61 73 65 80 62 6f 74 68 80 6e 6f 72 6d 61 6c 80 61 6e 64 80 61 62 6e 6f 72 6d 61 6c cf h.case.both.normal.and.abnormal.
91a0 a2 50 4d 4e a3 80 69 6e 80 a2 50 4d 41 a3 84 74 72 65 61 74 65 64 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 61 .PMN..in..PMA..treated.samples.a
91c0 72 65 80 65 61 73 69 6c 79 80 69 64 65 6e 74 69 66 69 65 64 2c 80 77 69 74 68 80 74 68 65 80 70 re.easily.identified,.with.the.p
91e0 61 74 69 65 6e 74 80 68 61 76 69 6e 67 80 6f 6e 6c 79 80 31 38 25 80 6e 6f 72 6d 61 6c cf a2 50 atient.having.only.18%.normal..P
9200 4d 4e a3 80 61 6e 64 80 68 69 73 80 68 65 74 65 72 6f 7a 79 67 6f 75 73 80 6d 6f 74 68 65 72 80 MN..and.his.heterozygous.mother.
9220 68 61 76 69 6e 67 80 35 30 25 80 6e 6f 72 6d 61 6c 80 a2 50 4d 4e a3 80 61 73 f2 08 f2 80 f3 08 having.50%.normal..PMN..as......
9240 f3 65 78 70 65 63 74 65 64 80 69 6e 80 74 68 65 80 58 84 6c 69 6e 6b 65 64 80 66 6f 72 6d 80 6f .expected.in.the.X.linked.form.o
9260 66 d0 03 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 00 d0 9c 74 68 65 80 64 69 73 65 61 f...........,`'*.......the.disea
9280 73 65 2e cc f1 01 06 00 f1 cc cc f2 0c f2 a2 49 4d 4d 55 4e 4f 50 48 45 4e 4f 54 59 50 49 4e 47 se.............IMMUNOPHENOTYPING
92a0 a3 f3 0c f3 3a d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 22 00 1e 20 00 01 20 15 00 d0 cc f2 0c f2 50 72 ....:...........".............Pr
92c0 69 6e 63 69 70 6c 65 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 90 24 e0 1f 22 00 01 20 15 00 d0 cc inciple..............$..".......
92e0 4d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 2f a2 6d 61 63 72 6f 70 68 61 67 65 73 a3 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 Monocytes/.macrophages..and.neut
9300 72 6f 70 68 69 6c 73 80 70 6c 61 79 80 69 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 72 6f 6c 65 73 80 69 6e 80 rophils.play.important.roles.in.
9320 6e 6f 6e 73 70 65 63 69 66 69 63 80 70 72 69 6d 61 72 79 80 68 6f 73 74 cf 64 65 66 65 6e 73 65 nonspecific.primary.host.defense
9340 80 6d 65 63 68 61 6e 69 73 6d 73 80 61 6e 64 80 69 6e 80 74 68 65 80 72 65 67 75 6c 61 74 69 6f .mechanisms.and.in.the.regulatio
9360 6e 80 6f 66 80 73 70 65 63 69 66 69 63 80 63 65 6c 6c 75 6c 61 72 80 61 6e 64 80 68 75 6d 6f 72 n.of.specific.cellular.and.humor
9380 61 6c 80 69 6d 6d 75 6e 65 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 73 2e 80 cf 54 68 65 73 65 80 65 66 66 65 al.immune.responses...These.effe
93a0 63 74 6f 72 80 6d 65 63 68 61 6e 69 73 6d 73 80 61 72 65 80 6d 65 64 69 61 74 65 64 80 74 68 72 ctor.mechanisms.are.mediated.thr
93c0 6f 75 67 68 80 69 6d 70 6f 72 74 61 6e 74 80 6c 69 67 61 6e 64 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 ough.important.ligand.receptors.
93e0 6f 6e 80 74 68 65 80 63 79 74 6f 70 6c 61 73 6d 69 63 cf 6d 65 6d 62 72 61 6e 65 80 6f 66 80 70 on.the.cytoplasmic.membrane.of.p
9400 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 2e 80 80 52 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 66 6f 72 80 74 68 65 80 46 63 hagocytes...Receptors.for.the.Fc
9420 80 72 65 67 69 6f 6e 80 6f 66 80 68 75 6d 61 6e 80 69 6d 6d 75 6e 6f 67 6c 6f 62 75 6c 69 6e 80 .region.of.human.immunoglobulin.
9440 47 80 28 a2 43 44 31 36 a3 2c 80 a2 46 63 52 a3 cf 49 49 49 3b 80 43 44 80 33 32 2c 80 a2 46 63 G.(.CD16.,..FcR..III;.CD.32,..Fc
9460 52 a3 80 49 49 3b 80 a2 43 44 36 34 a3 2c 80 a2 46 63 52 a3 80 49 29 2c 80 61 73 80 77 65 6c 6c R..II;..CD64.,..FcR..I),.as.well
9480 80 61 73 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 29 2c 80 70 6c 61 79 80 63 72 75 63 69 61 6c 80 72 6f 6c 65 .as.receptor),.play.crucial.role
94a0 73 80 69 6e 80 74 68 65 80 62 69 6e 64 69 6e 67 80 6f 66 cf 69 6d 6d 75 6e 65 84 a2 63 6f 6d 70 s.in.the.binding.of.immune..comp
94c0 6c 65 78 65 64 a3 80 61 6e 74 69 67 65 6e 73 80 74 6f 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 80 63 65 6c lexed..antigens.to.phagocyte.cel
94e0 6c 80 73 75 72 66 61 63 65 73 2c 80 74 68 75 73 80 66 61 63 69 6c 69 74 61 74 69 6e 67 80 a2 70 l.surfaces,.thus.facilitating..p
9500 68 61 67 6f 63 79 74 6f 73 69 73 a3 80 61 6e 64 cf 63 6c 65 61 72 61 6e 63 65 80 6f 66 80 69 6e hagocytosis..and.clearance.of.in
9520 76 61 64 69 6e 67 80 70 61 74 68 6f 67 65 6e 73 2e 80 80 46 75 72 74 68 65 72 6d 6f 72 65 2c 80 vading.pathogens...Furthermore,.
9540 74 68 65 80 65 78 70 72 65 73 73 69 6f 6e 80 6f 66 80 63 65 6c 6c 80 73 75 72 66 61 63 65 80 61 the.expression.of.cell.surface.a
9560 64 68 65 73 69 6f 6e d0 03 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 00 d0 9c 6d 6f 6c dhesion...........,`'*.......mol
9580 65 63 75 6c 65 73 2c 80 73 75 63 68 80 61 73 80 43 44 31 38 2c 80 69 73 80 65 73 73 65 6e 74 69 ecules,.such.as.CD18,.is.essenti
95a0 61 6c 80 66 6f 72 80 74 68 65 80 64 69 72 65 63 74 65 64 80 6d 69 67 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 al.for.the.directed.migration.of
95c0 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 74 6f 80 73 69 74 65 73 80 6f 66 cf 69 6e 66 6c 61 6d 6d 61 .phagocytes.to.sites.of.inflamma
95e0 74 69 6f 6e 2e 80 80 54 68 65 73 65 80 73 61 6d 65 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 66 6f 75 6e tion...These.same.receptors.foun
9600 64 80 6f 6e 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 2f 6d 61 63 72 6f 70 68 61 67 65 73 80 73 65 72 76 65 d.on.monocytes/macrophages.serve
9620 80 74 6f 80 65 78 70 65 64 69 74 65 80 74 68 65 cf 69 6e 74 65 72 6e 61 6c 69 7a 61 74 69 6f 6e .to.expedite.the.internalization
9640 80 6f 66 80 61 6e 74 69 67 65 6e 73 80 74 68 61 74 80 63 6f 6e 74 72 69 62 75 74 65 80 74 6f 80 .of.antigens.that.contribute.to.
9660 61 6e 74 69 67 65 6e 80 70 72 6f 63 65 73 73 69 6e 67 80 77 69 74 68 80 73 75 62 73 65 71 75 65 antigen.processing.with.subseque
9680 6e 74 80 70 72 65 73 65 6e 74 61 74 69 6f 6e 80 74 6f cf 69 6d 6d 75 6e 6f 72 65 67 75 6c 61 74 nt.presentation.to.immunoregulat
96a0 6f 72 79 80 54 80 63 65 6c 6c 73 2e 80 80 49 6e 80 61 64 64 69 74 69 6f 6e 80 74 6f 80 6f 75 74 ory.T.cells...In.addition.to.out
96c0 80 6b 6e 6f 77 6c 65 64 67 65 80 6f 66 80 70 61 74 69 65 6e 74 73 80 77 69 74 68 80 64 65 66 69 .knowledge.of.patients.with.defi
96e0 63 69 65 6e 63 69 65 73 80 6f 66 80 63 65 6c 6c cf 73 75 72 66 61 63 65 80 72 65 63 65 70 74 6f ciencies.of.cell.surface.recepto
9700 72 73 80 28 43 44 31 31 62 2c 80 43 44 31 36 2c 80 43 44 31 38 29 80 77 68 69 63 68 80 70 72 65 rs.(CD11b,.CD16,.CD18).which.pre
9720 64 69 73 70 6f 73 65 80 74 68 65 6d 80 74 6f 80 69 6e 66 65 63 74 69 6f 6e 73 80 28 36 2c 31 30 dispose.them.to.infections.(6,10
9740 2c 31 33 29 2c 80 77 65 80 68 61 76 65 cf 6c 65 61 72 6e 65 64 80 6d 75 63 68 80 61 62 6f 75 74 ,13),.we.have.learned.much.about
9760 80 6d 6f 64 75 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 74 68 65 73 65 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 69 .modulation.of.these.receptors.i
9780 6e 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 80 74 6f 80 76 61 72 69 6f 75 73 80 63 79 74 6f 6b 69 6e 65 73 28 n.response.to.various.cytokines(
97a0 35 29 2e 80 80 54 68 69 73 cf 6b 6e 6f 77 6c 65 64 67 65 80 68 61 73 80 6c 65 64 80 74 6f 80 74 5)...This.knowledge.has.led.to.t
97c0 68 65 80 64 65 76 65 6c 6f 70 6d 65 6e 74 80 6f 66 80 63 79 74 6f 6b 69 6e 65 80 74 68 65 72 61 he.development.of.cytokine.thera
97e0 70 69 65 73 80 69 6e 80 70 61 74 69 65 6e 74 73 80 77 69 74 68 80 73 65 63 6f 6e 64 61 72 79 80 pies.in.patients.with.secondary.
9800 6f 72 cf 61 63 71 75 69 72 65 64 80 69 6d 6d 75 6e 65 80 64 65 66 69 63 69 65 6e 63 79 80 74 68 or.acquired.immune.deficiency.th
9820 61 74 80 61 72 65 80 64 65 73 69 67 6e 65 64 80 74 6f 80 75 70 72 65 67 75 6c 61 74 65 80 72 65 at.are.designed.to.upregulate.re
9840 63 65 70 74 6f 72 73 80 6f 6e 80 74 68 65 80 73 75 72 66 61 63 65 80 6f 66 cf 70 68 61 67 6f 63 ceptors.on.the.surface.of.phagoc
9860 79 74 65 73 2c 80 6c 65 61 64 69 6e 67 80 74 6f 80 65 6e 68 61 6e 63 65 64 80 70 68 61 67 6f 63 ytes,.leading.to.enhanced.phagoc
9880 79 74 69 63 80 65 66 66 65 63 74 6f 72 80 6d 65 63 68 61 6e 69 73 6d 73 80 28 34 2c 37 2c 31 31 ytic.effector.mechanisms.(4,7,11
98a0 29 2e 80 80 46 6f 72 80 65 78 61 6d 70 6c 65 2c 80 67 61 6d 6d 61 cf 69 6e 74 65 72 66 65 72 6f )...For.example,.gamma.interfero
98c0 6e 80 74 68 65 72 61 70 79 80 6c 65 61 64 73 80 74 6f 80 74 68 65 80 75 70 72 65 67 75 6c 61 74 n.therapy.leads.to.the.upregulat
98e0 69 6f 6e 80 6f 66 80 46 63 52 80 49 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 28 43 44 36 34 29 80 6f 6e ion.of.FcR.I.receptors.(CD64).on
9900 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 69 73 cf 72 65 66 6c 65 63 74 65 64 80 69 6e 80 65 .monocytes.and.is.reflected.in.e
9920 6e 68 61 6e 63 65 64 80 6d 69 63 72 6f 62 69 63 69 64 61 6c 80 61 63 74 69 76 69 74 79 80 61 73 nhanced.microbicidal.activity.as
9940 80 77 65 6c 6c 80 61 73 80 69 6e 80 65 6e 68 61 6e 63 65 64 80 6c 79 6d 70 68 6f 70 72 6f 6c 69 .well.as.in.enhanced.lymphoproli
9960 66 65 72 61 74 69 76 65 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 73 cf 74 6f 80 72 65 63 61 6c 6c 80 61 6e 74 ferative.responses.to.recall.ant
9980 69 67 65 6e 73 2e cc cc 54 68 65 73 65 80 6e 65 77 80 74 68 65 72 61 70 69 65 73 80 68 61 76 65 igens...These.new.therapies.have
99a0 80 64 69 63 74 61 74 65 64 80 74 68 65 80 64 65 76 65 6c 6f 70 6d 65 6e 74 80 6f 66 80 63 6c 69 .dictated.the.development.of.cli
99c0 6e 69 63 61 6c 80 6c 61 62 6f 72 61 74 6f 72 79 80 61 73 73 61 79 73 80 74 68 61 74 80 61 72 65 nical.laboratory.assays.that.are
99e0 80 62 6f 74 68 cf 70 72 61 63 74 69 63 61 6c 80 61 6e 64 80 63 6c 69 6e 69 63 61 6c 6c 79 80 75 .both.practical.and.clinically.u
9a00 73 65 66 75 6c 80 69 6e 80 6d 6f 6e 69 74 6f 72 69 6e 67 80 74 68 65 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 seful.in.monitoring.the.response
9a20 80 74 6f 80 63 79 74 6f 6b 69 6e 65 80 74 68 65 72 61 70 79 2e 80 80 46 6c 6f 77 80 63 79 74 6f .to.cytokine.therapy...Flow.cyto
9a40 6d 65 74 72 69 63 2c cf 6d 75 6c 74 69 70 61 72 61 6d 65 74 72 69 63 80 61 6e 61 6c 79 73 69 73 metric,.multiparametric.analysis
9a60 80 6f 66 80 73 75 62 70 6f 70 75 6c 61 74 69 6f 6e 73 80 6f 66 80 63 65 6c 6c 73 80 64 65 72 69 .of.subpopulations.of.cells.deri
9a80 76 65 64 80 66 72 6f 6d 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 73 70 65 63 69 6d 65 6e 73 80 61 ved.from.whole.blood.specimens.a
9aa0 6c 6c 6f 77 73 cf 66 6f 72 80 74 68 65 80 61 63 63 75 72 61 74 65 80 71 75 61 6e 74 69 74 61 74 llows.for.the.accurate.quantitat
9ac0 69 6f 6e 80 6f 66 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 80 65 78 70 72 65 73 73 69 6f 6e 80 6f 6e 80 74 68 ion.of.receptor.expression.on.th
9ae0 65 80 73 75 72 66 61 63 65 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 e.surface.of.monocytes.and.neutr
9b00 6f 70 68 69 6c 73 2e 80 cf 54 68 69 73 80 6d 65 74 68 6f 64 6f 6c 6f 67 79 80 6e 6f 74 80 6f 6e ophils...This.methodology.not.on
9b20 6c 79 80 64 65 74 65 63 74 73 80 74 68 65 80 70 72 65 73 65 6e 63 65 80 6f 72 80 61 62 73 65 6e ly.detects.the.presence.or.absen
9b40 63 65 80 6f 66 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 2c 80 62 75 74 80 61 6c 73 6f 80 65 76 61 6c 75 61 ce.of.receptors,.but.also.evalua
9b60 74 65 73 80 74 68 65 cf 72 65 67 75 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 65 78 70 72 65 73 73 69 6f 6e tes.the.regulation.of.expression
9b80 80 6f 66 80 74 68 65 73 65 80 72 65 63 65 70 74 6f 72 73 80 69 6e 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 80 .of.these.receptors.in.response.
9ba0 74 6f 80 76 61 72 69 6f 75 73 80 73 74 69 6d 75 6c 69 2e 80 80 54 68 65 80 74 65 63 68 6e 69 71 to.various.stimuli...The.techniq
9bc0 75 65 cf 65 6d 70 6c 6f 79 73 80 6d 75 6c 74 69 70 6c 65 80 6d 6f 6e 6f 63 6c 6f 6e 61 6c 80 61 ue.employs.multiple.monoclonal.a
9be0 6e 74 69 62 6f 64 69 65 73 80 6c 61 62 65 6c 65 64 80 77 69 74 68 80 64 69 66 66 65 72 65 6e 74 ntibodies.labeled.with.different
9c00 80 66 6c 75 6f 72 6f 63 68 72 6f 6d 65 73 80 74 68 61 74 80 69 64 65 6e 74 69 66 79 cf 72 65 63 .fluorochromes.that.identify.rec
9c20 65 70 74 6f 72 80 65 78 70 72 65 73 73 69 6f 6e 80 6f 66 80 73 70 65 63 69 66 69 63 80 73 75 62 eptor.expression.of.specific.sub
9c40 70 6f 70 75 6c 61 74 69 6f 6e 73 80 6f 66 80 70 68 61 67 6f 63 79 74 65 73 80 64 65 72 69 76 65 populations.of.phagocytes.derive
9c60 64 80 66 72 6f 6d 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 2c 80 74 68 69 73 cf 63 69 72 63 75 6d 76 d.from.whole.blood,.this.circumv
9c80 65 6e 74 69 6e 67 80 74 68 65 80 6e 65 65 64 80 66 6f 72 80 74 69 6d 65 80 63 6f 6e 73 75 6d 69 enting.the.need.for.time.consumi
9ca0 6e 67 80 63 65 6c 6c 80 70 75 72 69 66 69 63 61 74 69 6f 6e 2e cc cc f2 0c f2 53 70 65 63 69 6d ng.cell.purification......Specim
9cc0 65 6e f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 40 1a 90 15 17 00 01 20 15 00 d0 cc 45 44 54 41 80 en.............@...........EDTA.
9ce0 61 6e 74 69 63 6f 61 67 75 6c 61 74 65 64 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 69 73 80 6f 62 anticoagulated.whole.blood.is.ob
9d00 74 61 69 6e 65 64 80 66 72 6f 6d 80 74 68 65 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 61 6e 64 80 61 80 6e 6f tained.from.the.patient.and.a.no
9d20 72 6d 61 6c 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 73 75 62 6a 65 63 74 2e 80 cf 54 68 65 80 76 6f 6c 75 6d rmal.control.subject...The.volum
9d40 65 80 6f 66 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 6e 65 65 64 65 64 80 69 73 80 64 65 70 65 6e e.of.whole.blood.needed.is.depen
9d60 64 65 6e 74 80 75 70 6f 6e 80 74 68 65 80 6e 75 6d 62 65 72 80 6f 66 80 64 69 66 66 65 72 65 6e dent.upon.the.number.of.differen
9d80 74 80 63 65 6c 6c 80 73 75 72 66 61 63 65 cf 6d 61 72 6b 65 72 73 80 65 76 61 6c 75 61 74 65 64 t.cell.surface.markers.evaluated
9da0 2c 80 77 69 74 68 80 30 2e 31 80 6d 6c 80 6f 66 80 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 6e 65 65 ,.with.0.1.ml.of.whole.blood.nee
9dc0 64 65 64 80 66 6f 72 80 65 61 63 68 80 6d 61 72 6b 65 72 2e 80 80 55 73 75 61 6c 6c 79 80 30 2e ded.for.each.marker...Usually.0.
9de0 35 80 74 6f 80 31 2e 30 80 6d 6c 80 6f 66 cf 77 68 6f 6c 65 80 62 6c 6f 6f 64 80 69 73 80 61 64 5.to.1.0.ml.of.whole.blood.is.ad
9e00 65 71 75 61 74 65 80 66 6f 72 80 6d 6f 73 74 80 73 74 75 64 69 65 73 2e 80 80 54 68 65 80 73 70 equate.for.most.studies...The.sp
9e20 65 63 69 6d 65 6e 73 80 61 72 65 80 6d 61 69 6e 74 61 69 6e 65 64 80 61 74 80 72 6f 6f 6d 80 74 ecimens.are.maintained.at.room.t
9e40 65 6d 70 65 72 61 74 75 72 65 cf 75 6e 74 69 6c 80 70 72 6f 63 65 73 73 65 64 2e cc cc f2 0c f2 emperature.until.processed......
9e60 52 65 61 67 65 6e 74 73 80 61 6e 64 80 53 75 70 70 6c 69 65 73 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 Reagents.and.Supplies...........
9e80 00 01 c0 21 10 1d 1f 00 01 20 15 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 53 74 61 6e 64 61 ...!...........0..........Standa
9ea0 72 64 80 42 72 69 74 65 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 63 61 6c 69 62 72 61 74 69 6f rd.Brite.fluorescence.calibratio
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9ee0 69 61 6c 63 61 68 2c 80 46 6c 61 2e 29 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 ialcah,.Fla.)............(#..(#.
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a7a0 00 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 00 d0 d4 27 13 00 01 02 00 a0 05 03 e0 1f 08 9f 00 00 13 ..p.(#p.(#......'...............
a7c0 00 d4 cc e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 36 2e e0 30 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 ....0..........6..0.....p...(#..
a7e0 28 23 14 00 e0 42 65 66 6f 72 65 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6e 67 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 62 (#...Before.evaluating.samples.b
a800 79 80 66 6c 6f 77 80 63 79 74 6f 6d 65 74 72 79 2c 80 74 68 65 80 69 6e 73 74 72 75 6d 65 6e 74 y.flow.cytometry,.the.instrument
a820 80 6d 75 73 74 80 62 65 80 63 61 6c 69 62 72 61 74 65 64 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 25 d0 .must.be.calibrated...........%.
a840 20 23 00 01 20 15 00 d0 75 73 69 6e 67 80 61 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 73 74 61 .#......using.a.fluorescence.sta
a860 6e 64 61 72 64 80 66 6f 72 80 74 68 65 80 6d 65 61 73 75 72 65 6d 65 6e 74 80 6f 66 80 66 6c 75 ndard.for.the.measurement.of.flu
a880 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 69 6e 74 65 6e 73 69 74 79 2e 80 80 55 73 69 6e 67 80 61 cf 73 74 orescence.intensity...Using.a.st
a8a0 61 6e 64 61 72 64 80 74 77 6f 80 63 6f 6c 6f 72 80 70 72 6f 74 6f 63 6f 6c 2c 80 65 76 61 6c 75 andard.two.color.protocol,.evalu
a8c0 61 74 65 80 53 74 61 6e 64 61 72 64 80 42 72 69 74 65 80 73 70 68 65 72 65 73 80 66 6f 72 80 66 ate.Standard.Brite.spheres.for.f
a8e0 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 cf 69 6e 74 65 6e 73 69 74 79 2e 80 80 41 64 6a 75 73 74 80 74 luorescence.intensity...Adjust.t
a900 68 65 80 6c 61 73 65 72 80 70 6f 77 65 72 80 73 6f 80 74 68 61 74 80 74 68 65 80 6d 65 61 6e 80 he.laser.power.so.that.the.mean.
a920 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 76 61 6c 75 65 cf 6f 62 73 65 72 channel.fluorescence.value.obser
a940 76 65 64 80 66 6f 72 80 62 6f 74 68 80 72 65 64 80 61 6e 64 80 67 72 65 65 6e 80 66 6c 75 6f 72 ved.for.both.red.and.green.fluor
a960 65 73 63 65 6e 63 65 80 69 73 80 65 73 73 65 6e 74 69 61 6c 80 69 64 65 6e 74 69 63 61 6c 80 74 escence.is.essential.identical.t
a980 6f 80 76 61 6c 75 65 73 80 72 65 63 6f 72 64 65 64 cf 66 72 6f 6d 80 74 68 65 80 70 72 65 76 69 o.values.recorded.from.the.previ
a9a0 6f 75 73 80 69 6e 73 74 72 75 6d 65 6e 74 80 63 61 6c 69 62 72 61 74 69 6f 6e 2e 80 80 4d 69 6e ous.instrument.calibration...Min
a9c0 6f 72 80 61 64 6a 75 73 74 6d 65 6e 74 73 80 69 6e 80 76 6f 6c 74 61 67 65 80 73 65 74 74 69 6e or.adjustments.in.voltage.settin
a9e0 67 80 6f 66 cf 65 61 63 68 80 70 68 6f 74 6f 6d 75 6c 74 69 70 6c 69 65 72 80 74 75 62 65 80 75 g.of.each.photomultiplier.tube.u
aa00 73 65 64 80 66 6f 72 80 74 68 65 80 64 65 74 65 63 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 65 69 74 68 65 72 80 sed.for.the.detection.of.either.
aa20 72 65 64 80 6f 72 80 67 72 65 65 6e 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 cf 6d 61 79 80 61 6c red.or.green.fluorescence.may.al
aa40 73 6f 80 62 65 80 72 65 71 75 69 72 65 64 2e 80 d0 06 1f 00 00 15 00 13 00 01 10 2c 60 27 2a 00 so.be.required.............,`'*.
aa60 01 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 1f 00 d0 87 e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 37 2e e0 30 ..p.(#p.(#.......0..........7..0
aa80 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 80 63 6f 6e 74 72 .....p...(#..(#...Evaluate.contr
aaa0 6f 6c 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 66 69 72 73 74 2c 80 6f 62 73 65 72 76 69 6e 67 80 74 68 65 80 ol.samples.first,.observing.the.
aac0 6c 69 67 68 74 80 73 63 61 74 74 65 72 80 63 68 61 72 61 63 74 65 72 69 73 74 69 63 73 80 6f 66 light.scatter.characteristics.of
aae0 80 74 68 65 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 00 00 00 00 01 20 15 00 d0 73 61 6d 70 6c 65 80 .the.....................sample.
ab00 73 74 61 69 6e 65 64 80 77 69 74 68 80 50 45 84 43 44 31 34 80 6f 72 80 46 49 54 43 84 43 44 31 stained.with.PE.CD14.or.FITC.CD1
ab20 31 62 2e 80 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 1b............p.(#p.(#.......0..
ab40 00 00 00 90 06 0c 00 e0 38 2e e0 30 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 43 6f ........8..0.....p...(#..(#...Co
ab60 6e 73 74 72 75 63 74 80 61 80 67 61 74 65 80 61 72 6f 75 6e 64 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 nstruct.a.gate.around.monocytes.
ab80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 61 6e 64 80 61 73 73 69 67 6e 80 65 61 63 68 80 and.neutrophils.and.assign.each.
aba0 67 61 74 65 80 74 6f 80 61 6e d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 80 07 d0 02 03 00 01 20 15 00 d0 69 gate.to.an.....................i
abc0 6e 64 69 76 69 64 75 61 6c 80 74 77 6f 84 70 61 72 61 6d 65 74 65 72 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 ndividual.two.parameter.fluoresc
abe0 65 6e 63 65 80 68 69 73 74 6f 67 72 61 6d 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 70 08 28 23 70 08 28 ence.histogram...........p.(#p.(
ac00 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 39 2e e0 30 14 00 00 00 00 70 08 90 06 #.......0..........9..0.....p...
ac20 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 41 64 6a 75 73 74 80 74 68 65 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 80 67 61 74 (#..(#...Adjust.the.monocyte.gat
ac40 65 80 61 6e 64 80 72 65 64 84 67 72 65 65 6e 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 63 75 72 e.and.red.green.fluorescence.cur
ac60 73 6f 72 73 80 75 6e 74 69 6c 80 67 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 d0 01 15 00 00 sors.until.greater.than.95%.....
ac80 0b 00 09 00 01 50 0a a0 05 06 00 01 20 15 00 d0 6f 66 80 72 65 64 84 67 72 65 65 6e 80 73 69 67 .....P..........of.red.green.sig
aca0 6e 61 6c 73 80 61 70 70 65 61 72 80 69 6e 80 74 68 65 80 72 65 64 84 67 72 65 65 6e 80 70 6f 73 nals.appear.in.the.red.green.pos
acc0 69 74 69 76 65 80 71 75 61 64 72 61 6e 74 80 28 71 75 61 64 72 61 6e 74 80 32 29 2e 80 80 41 64 itive.quadrant.(quadrant.2)...Ad
ace0 6a 75 73 74 cf 74 68 65 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 80 67 61 74 65 80 75 6e 74 69 6c 80 67 just.the.neutrophil.gate.until.g
ad00 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 80 6f 66 80 74 68 65 80 72 65 64 84 67 72 65 65 6e reater.than.95%.of.the.red.green
ad20 80 73 69 67 6e 61 6c 73 80 61 70 70 65 61 72 80 69 6e 80 74 68 65 80 72 65 64 cf 6e 65 67 61 74 .signals.appear.in.the.red.negat
ad40 69 76 65 84 67 72 65 65 6e 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 71 75 61 64 72 61 6e 74 80 28 71 75 61 ive.green.positive.quadrant.(qua
ad60 64 72 61 6e 74 80 34 29 2e 80 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 00 drant.4)............p.(#p.(#....
ad80 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 31 30 2e e0 30 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 ...0..........10..0.....p...(#..
ada0 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c 75 61 74 65 80 74 68 65 80 65 80 73 61 6d 70 6c 65 80 73 74 61 69 6e (#...Evaluate.the.e.sample.stain
adc0 65 64 80 77 69 74 68 80 74 68 65 80 69 73 6f 74 79 70 65 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 66 6f 72 80 ed.with.the.isotype.control.for.
ade0 74 68 65 80 50 45 84 43 44 31 34 2f 46 54 54 43 84 43 31 31 62 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 00 the.PE.CD14/FTTC.C11b...........
ae00 0f 50 0a 0b 00 01 20 15 00 d0 73 61 6d 70 6c 65 2e 80 80 47 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 .P........sample...Greater.than.
ae20 39 35 25 80 6f 66 80 74 68 65 80 72 65 64 84 67 72 65 65 6e 80 73 69 67 6e 61 6c 73 80 73 68 6f 95%.of.the.red.green.signals.sho
ae40 75 6c 64 80 61 70 70 65 61 72 80 77 69 74 68 69 6e 80 74 68 65 80 72 65 64 cf 6e 65 67 61 74 69 uld.appear.within.the.red.negati
ae60 76 65 84 67 72 65 65 6e 80 6e 65 67 61 74 69 76 65 80 71 75 61 64 72 61 6e 74 80 28 71 75 61 64 ve.green.negative.quadrant.(quad
ae80 72 61 6e 74 80 33 29 80 66 6f 72 80 62 6f 74 68 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6e rant.3).for.both.monocytes.and.n
aea0 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 eutrophils...........p.(#p.(#...
aec0 00 d0 cc d4 26 0c 00 01 02 00 d0 02 0c 00 d4 e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 31 31 2e e0 30 ....&...........0..........11..0
aee0 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 52 65 65 76 61 6c 75 61 74 65 80 74 68 65 .....p...(#..(#...Reevaluate.the
af00 80 73 61 6d 70 6c 65 80 73 74 61 69 6e 65 64 80 77 69 74 68 80 50 45 84 43 44 31 34 2f 46 49 54 .sample.stained.with.PE.CD14/FIT
af20 43 84 43 44 31 31 62 80 61 6e 64 80 61 63 63 75 6d 75 6c 61 74 65 80 32 2c 30 30 30 d0 01 15 00 C.CD11b.and.accumulate.2,000....
af40 00 0b 00 09 00 01 c0 12 10 0e 0f 00 01 20 15 00 d0 65 76 65 6e 74 73 80 77 69 74 68 80 74 68 65 .................events.with.the
af60 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 80 67 61 74 65 2e 80 80 52 65 63 6f 72 64 80 62 6f 74 68 80 70 65 72 .monocyte.gate...Record.both.per
af80 63 65 6e 74 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 80 61 6e 64 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 cent.positive.cells.and.mean.cha
afa0 6e 6e 65 6c cf 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 d4 27 13 00 01 02 00 d0 02 03 c0 12 10 a8 nnel.fluorescence..'............
afc0 00 00 13 00 d4 76 61 6c 75 65 73 80 66 6f 72 80 62 6f 74 68 80 72 65 64 80 61 6e 64 80 67 72 65 .....values.for.both.red.and.gre
afe0 65 6e 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 64 69 73 74 72 69 62 75 74 69 6f 6e 73 80 66 6f en.fluorescence.distributions.fo
b000 72 80 62 6f 74 68 cf 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 r.both.monocytes.and.neutrophils
b020 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 ...........p.(#p.(#.......0.....
b040 90 06 0c 00 e0 31 32 2e e0 30 14 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 45 76 61 6c .....12..0.....p...(#..(#...Eval
b060 75 61 74 65 80 72 65 6d 61 69 6e 69 6e 67 80 73 61 6d 70 6c 65 73 2c 80 72 65 63 6f 72 64 69 6e uate.remaining.samples,.recordin
b080 67 80 62 6f 74 68 80 70 65 72 63 65 6e 74 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 63 65 6c 6c 73 80 61 6e g.both.percent.positive.cells.an
b0a0 64 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 70 17 c0 12 14 00 01 20 d.mean.channel..........p.......
b0c0 15 00 d0 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 76 61 6c 75 65 73 80 66 6f 72 80 62 6f 74 68 80 ...fluorescence.values.for.both.
b0e0 72 65 64 80 61 6e 64 80 67 72 65 65 6e 80 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 66 72 6f 6d 80 red.and.green.fluorescence.from.
b100 61 70 70 72 6f 70 72 69 61 74 65 80 71 75 61 64 72 61 6e 74 73 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 appropriate.quadrants...........
b120 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 17 00 d0 cc e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 31 33 2e e0 30 14 p.(#p.(#.......0..........13..0.
b140 00 00 00 00 70 08 90 06 28 23 90 06 28 23 14 00 e0 52 65 70 65 61 74 80 73 74 65 70 73 80 37 80 ....p...(#..(#...Repeat.steps.7.
b160 74 68 72 6f 75 67 68 80 31 32 80 66 6f 72 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 73 61 6d 70 6c 65 73 2e d0 through.12.for.patient.samples..
b180 04 1f 00 00 15 00 13 00 01 40 1a 90 15 17 00 01 02 70 08 28 23 70 08 28 23 02 20 1f 00 d0 cc d4 .........@.......p.(#p.(#.......
b1a0 26 0c 00 01 02 00 c0 03 0c 00 d4 cc f2 0c f2 49 6e 74 65 72 70 72 65 74 61 74 69 6f 6e f3 0c f3 &..............Interpretation...
b1c0 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 10 1d 60 18 1a 00 01 20 15 00 d0 cc 50 61 74 69 65 6e 74 73 80 77 ............`.........Patients.w
b1e0 69 74 68 80 69 6e 74 65 6e 73 65 80 64 65 66 69 63 69 65 6e 63 69 65 73 80 6f 66 80 43 44 31 31 ith.intense.deficiencies.of.CD11
b200 62 80 61 6e 64 80 43 44 31 38 80 77 69 6c 6c 80 73 68 6f 77 80 6e 6f 80 65 78 70 72 65 73 73 69 b.and.CD18.will.show.no.expressi
b220 6f 6e 80 6f 66 80 74 68 65 73 65 80 d4 27 13 00 01 02 00 c0 03 03 20 1c ec aa 00 00 13 00 d4 6d on.of.these..'.................m
b240 61 72 6b 65 72 73 cf 6f 6e 80 43 44 31 34 84 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 arkers.on.CD14.positive.monocyte
b260 73 80 6f 72 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 2c 80 77 68 69 6c 65 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c 80 s.or.neutrophils,.while.control.
b280 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 61 6e 64 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 77 69 6c 6c 80 62 monocytes.and.neutrophils.will.b
b2a0 65 cf 67 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 80 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 66 6f 72 80 e.greater.than.95%.positive.for.
b2c0 62 6f 74 68 80 6d 61 72 6b 65 72 73 2e 80 80 4d 6f 64 75 6c 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 43 44 31 both.markers...Modulation.of.CD1
b2e0 31 62 2c 80 43 44 31 38 2c 80 43 44 36 34 2c 80 43 44 33 32 2c 80 6f 72 cf 43 44 31 36 80 6d 75 1b,.CD18,.CD64,.CD32,.or.CD16.mu
b300 73 74 80 62 65 80 63 61 72 65 66 75 6c 6c 79 80 69 6e 74 65 72 70 72 65 74 65 64 80 6f 6e 80 74 st.be.carefully.interpreted.on.t
b320 68 65 80 62 61 73 69 73 80 6f 66 80 65 73 74 61 62 6c 69 73 68 6d 65 6e 74 80 6f 66 80 61 80 6e he.basis.of.establishment.of.a.n
b340 6f 72 6d 61 6c 80 6d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c cf 66 6c 75 6f 72 65 73 63 65 6e 63 65 80 ormal.mean.channel.fluorescence.
b360 72 61 6e 67 65 80 66 6f 72 80 65 61 63 68 80 6d 61 72 6b 65 72 80 6f 6e 80 65 69 74 68 65 72 80 range.for.each.marker.on.either.
b380 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 80 6f 62 74 61 69 6e 65 monocytes.or.neutrophils.obtaine
b3a0 64 80 66 72 6f 6d 80 63 6f 6e 74 72 6f 6c cf 73 75 62 6a 65 63 74 73 2e 80 80 42 65 63 61 75 73 d.from.control.subjects...Becaus
b3c0 65 80 74 68 65 73 65 80 6d 61 72 6b 65 72 73 80 63 61 6e 80 62 65 80 6d 6f 64 75 6c 61 74 65 64 e.these.markers.can.be.modulated
b3e0 80 62 79 80 61 63 75 74 65 80 6f 72 80 63 68 72 6f 6e 69 63 80 69 6e 66 6c 61 6d 6d 61 74 69 6f .by.acute.or.chronic.inflammatio
b400 6e 2c cf 69 6e 74 65 72 70 72 65 74 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 72 65 73 75 6c 74 73 80 69 6e 80 n,.interpretation.of.results.in.
b420 74 68 65 80 73 65 74 74 69 6e 67 80 6f 66 80 63 79 74 6f 6b 69 6e 65 80 74 68 65 72 61 70 79 80 the.setting.of.cytokine.therapy.
b440 6d 75 73 74 80 61 6c 73 6f 80 74 61 6b 65 80 74 68 65 80 63 6c 69 6e 69 63 61 6c 80 73 74 61 74 must.also.take.the.clinical.stat
b460 75 73 80 6f 66 80 74 68 65 cf 70 61 74 69 65 6e 74 80 69 6e 74 6f 80 63 6f 6e 73 69 64 65 72 61 us.of.the.patient.into.considera
b480 74 69 6f 6e 80 2e 80 80 4d 65 61 6e 80 63 68 61 6e 6e 65 6c 80 76 61 6c 75 65 73 80 6f 62 74 61 tion....Mean.channel.values.obta
b4a0 69 6e 65 64 80 66 6f 72 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 6f 72 80 6e 65 ined.for.patient.monocytes.or.ne
b4c0 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 cf 61 72 65 80 63 6f 6d 70 61 72 65 64 80 77 69 74 68 80 63 6f 6e 74 utrophils.are.compared.with.cont
b4e0 72 6f 6c 80 72 61 6e 67 65 73 80 6f 72 80 77 69 74 68 80 76 61 6c 75 65 73 80 6f 62 74 61 69 6e rol.ranges.or.with.values.obtain
b500 65 64 80 77 69 74 68 80 70 61 74 69 65 6e 74 80 73 61 6d 70 6c 65 73 80 63 6f 6c 6c 65 63 74 65 ed.with.patient.samples.collecte
b520 64 80 70 72 69 6f 72 80 74 6f cf 63 79 74 6f 6b 69 6e 65 80 74 68 65 72 61 70 79 80 28 62 61 73 d.prior.to.cytokine.therapy.(bas
b540 65 6c 69 6e 65 80 76 61 6c 75 65 29 2e 80 80 46 69 67 75 72 65 80 32 80 69 6c 6c 75 73 74 72 61 eline.value)...Figure.2.illustra
b560 74 65 73 74 68 65 80 66 6c 6f 77 80 63 79 74 6f 6d 65 74 72 69 63 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6f testhe.flow.cytometric.evaluatio
b580 6e 80 6f 66 80 77 68 6f 6c 65 cf 62 6c 6f 6f 64 84 64 65 72 69 76 65 64 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 n.of.whole.blood.derived.monocyt
b5a0 65 73 80 66 6f 72 80 74 68 65 80 65 78 70 72 65 73 73 69 6f 6e 80 6f 66 80 43 44 31 31 62 80 61 es.for.the.expression.of.CD11b.a
b5c0 6e 64 80 43 44 31 38 2e 80 80 49 6e 80 65 61 63 68 80 69 6e 73 74 61 6e 63 65 2c 80 67 61 74 69 nd.CD18...In.each.instance,.gati
b5e0 6e 67 80 6f 6e cf 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 28 67 61 74 65 80 43 29 80 79 69 65 6c 64 65 64 ng.on.monocytes.(gate.C).yielded
b600 80 67 72 65 61 74 65 72 80 74 68 61 6e 80 39 35 25 80 43 44 31 34 84 70 6f 73 69 74 69 76 65 80 .greater.than.95%.CD14.positive.
b620 63 65 6c 6c 73 80 77 68 69 63 68 80 63 6f 65 78 70 72 65 73 73 65 64 80 62 6f 74 68 cf 43 44 31 cells.which.coexpressed.both.CD1
b640 31 62 80 61 6e 64 80 43 44 31 38 2e 80 80 54 68 65 73 65 80 64 61 74 61 80 69 6c 6c 75 73 74 72 1b.and.CD18...These.data.illustr
b660 61 74 65 80 74 68 65 80 65 61 73 65 80 69 6e 80 77 68 69 63 68 80 65 76 61 6c 75 61 74 69 6f 6e ate.the.ease.in.which.evaluation
b680 73 80 6f 66 80 6d 6f 6e 6f 63 79 74 65 73 80 66 72 6f 6d 80 77 68 6f 6c 65 cf 62 6c 6f 6f 64 80 s.of.monocytes.from.whole.blood.
b6a0 73 61 6d 70 6c 65 73 80 63 61 6e 80 62 65 80 61 63 68 69 65 76 65 64 2e cc d0 06 15 00 00 0b 00 samples.can.be.achieved.........
b6c0 09 00 01 10 2c 60 27 2a 00 01 20 15 00 d0 87 d0 09 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 00 00 00 00 01 ....,`'*........................
b6e0 20 15 00 d0 f2 0c f2 52 45 46 45 52 45 4e 43 45 53 f3 0c f3 d0 04 15 00 00 0b 00 09 00 01 b0 04 .......REFERENCES...............
b700 00 00 00 00 01 20 15 00 d0 cc 31 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 42 61 63 68 6e 65 72 2c ..........1..0..........Bachner,
b720 80 52 2e 4c 2c 80 61 6e 64 80 44 2e 47 2e 80 4e 61 74 68 61 6e 2e 80 31 39 39 36 2e 80 44 65 66 .R.L,.and.D.G..Nathan..1996..Def
b740 69 63 69 65 6e 74 80 67 6c 75 63 6f 73 65 80 6f 78 69 64 61 74 69 6f 6e 80 69 6e 80 74 68 65 80 icient.glucose.oxidation.in.the.
b760 69 6e 74 61 63 74 80 6c 65 75 6b 6f 63 79 74 65 73 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 90 06 e0 01 02 intact.leukocytes...............
b780 00 01 20 15 00 d0 6f 66 80 63 68 72 6f 6e 69 63 80 67 72 61 6e 75 6c 6f 6d 61 74 6f 75 73 80 64 ......of.chronic.granulomatous.d
b7a0 69 73 65 61 73 65 2e 80 42 6c 6f 6f 64 80 32 38 3a 31 30 31 30 84 31 30 31 31 2e d0 04 17 00 00 isease..Blood.28:1010.1011......
b7c0 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 cc 32 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 .......(#..(#......2..0.........
b7e0 e0 42 61 63 68 6e 65 72 2c 80 52 2e 80 4c 2c 80 61 6e 64 80 44 2e 47 2e 80 4e 61 74 68 61 6e 2e .Bachner,.R..L,.and.D.G..Nathan.
b800 80 31 39 36 38 2e 80 51 75 61 6e 74 69 74 61 74 69 76 65 80 6e 69 74 72 6f 62 6c 75 65 80 74 65 .1968..Quantitative.nitroblue.te
b820 74 72 61 7a 6f 6c 69 75 6d 80 74 65 73 74 80 69 6e 80 63 68 72 6f 6e 69 63 d0 01 15 00 00 0b 00 trazolium.test.in.chronic.......
b840 09 00 01 60 09 b0 04 05 00 01 20 15 00 d0 67 72 61 6e 75 6c 6f 6d 61 74 6f 75 73 80 64 69 73 65 ...`..........granulomatous.dise
b860 61 73 65 2c 80 4e 2e 80 45 6e 67 6c 2e 2e 80 4a 2e 80 4d 65 64 2e 80 32 37 38 84 39 37 31 84 39 ase,.N..Engl...J..Med..278.971.9
b880 37 36 2e d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 cc 33 2e e0 30 0c 76.............(#..(#......3..0.
b8a0 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 42 61 73 73 2c 80 44 2e 41 2e 2c 80 4a 2e 57 2e 80 50 61 72 63 65 2c .........Bass,.D.A.,.J.W..Parce,
b8c0 80 4c 80 52 2e 80 44 65 63 68 61 74 65 6c 65 74 2c 80 50 2e 80 53 7a 65 64 61 2c 80 4d 2e 43 2e .L.R..Dechatelet,.P..Szeda,.M.C.
b8e0 80 53 65 65 64 73 2c 80 61 6e 64 80 4d 2e 80 54 68 6f 6d 61 73 80 31 39 38 33 2e 80 d0 01 15 00 .Seeds,.and.M..Thomas.1983......
b900 00 0b 00 09 00 01 30 0c 80 07 08 00 01 20 15 00 d0 46 6c 6f 77 80 63 79 74 6f 6d 65 74 72 69 63 ......0..........Flow.cytometric
b920 80 73 74 75 64 69 65 73 80 6f 66 80 6f 78 69 64 61 74 69 76 65 80 70 72 6f 64 75 63 74 80 66 6f .studies.of.oxidative.product.fo
b940 72 6d 61 74 69 6f 6e 80 62 79 80 6e 65 75 74 72 6f 70 68 69 6c 73 3b 80 61 80 67 72 61 64 65 64 rmation.by.neutrophils;.a.graded
b960 80 72 65 73 70 6f 6e 73 65 cf 74 6f 80 6d 65 6d 62 72 61 6e 61 65 80 73 74 69 6d 75 6c 61 74 69 .response.to.membranae.stimulati
b980 6f 6e 2e 80 4a 2e 80 49 6d 6d 75 6e 6f 6c 80 31 33 30 3a 80 31 39 31 30 84 31 39 31 37 2e d0 04 on..J..Immunol.130:.1910.1917...
b9a0 17 00 00 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 cc 34 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 ..........(#..(#......4..0......
b9c0 06 0c 00 e0 43 61 69 72 6f 2c 80 4d 2e 53 2e 2c 80 52 80 43 68 72 69 73 74 65 6e 73 65 6e 2c 80 ....Cairo,.M.S.,.R.Christensen,.
b9e0 4c 2e 80 53 65 6e 64 65 72 2c 80 4a 2e 80 52 6f 73 65 6e 74 68 61 6c 2c 80 52 80 45 6c 6c 69 73 L..Sender,.J..Rosenthal,.R.Ellis
ba00 2c 80 45 80 47 69 6c 6c 69 61 6e 2c 80 61 6e 64 80 4a 2e 80 41 67 6f 73 74 69 2e 80 d0 01 15 00 ,.E.Gillian,.and.J..Agosti......
ba20 00 0b 00 09 00 01 f0 0f 40 0b 0c 00 01 20 15 00 d0 31 39 39 34 2e 80 80 57 69 6c 6c 80 61 64 6d ........@........1994...Will.adm
ba40 69 6e 69 73 74 72 61 74 69 6f 6e 80 6f 66 80 72 65 63 6f 6d 62 69 6e 61 6e 74 80 47 4d 84 43 53 inistration.of.recombinant.GM.CS
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baa0 6e 66 65 63 74 69 6f 6e 73 3f 80 52 65 73 75 6c 74 73 80 6f 66 80 61 80 70 68 61 73 65 80 49 80 nfections?.Results.of.a.phase.I.
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bae0 17 00 00 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 cc 35 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 ..........(#..(#......5..0......
bb00 06 0c 00 e0 43 61 69 72 6f 2c 80 4d 2e 53 2e 2c 80 43 2e 80 76 61 6e 80 64 65 80 56 65 6e 2c 80 ....Cairo,.M.S.,.C..van.de.Ven,.
bb20 43 2e 80 54 6f 79 2c 80 44 2e 80 4d 61 75 73 73 2c 80 61 6e 64 80 4c 80 53 65 6e 64 65 72 2c 80 C..Toy,.D..Mauss,.and.L.Sender,.
bb40 31 39 39 31 2e 80 47 4d 84 43 53 46 80 70 72 69 6d 65 73 80 61 6e 64 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 1991..GM.CSF.primes.and.........
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bc00 80 31 31 3a 32 33 38 84 32 34 34 2e 80 d0 04 17 00 00 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 .11:238.244..............(#..(#.
bc20 20 17 00 d0 cc 36 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 64 65 80 48 61 61 73 2c 80 4d 2e 2c 80 .....6..0..........de.Haas,.M.,.
bc40 4d 2e 80 4b 6c 65 69 6a 65 72 2c 80 52 80 76 61 6e 80 5a 77 69 65 74 65 6e 2c 80 44 2c 80 52 6f M..Kleijer,.R.van.Zwieten,.D,.Ro
bc60 6f 73 2c 80 61 6e 64 80 41 2e 45 2e 47 2e 4b 80 76 6f 6e 80 64 65 6d 80 42 6f 72 6e 65 2e 80 31 os,.and.A.E.G.K.von.dem.Borne..1
bc80 39 39 35 2e 80 d0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 70 17 c0 12 14 00 01 20 15 00 d0 4e 65 75 74 72 6f 995............p..........Neutro
bca0 70 68 69 6c 80 46 63 80 52 6c 6c 6c 62 80 64 65 66 69 63 69 65 6e 63 79 2c 80 6e 61 74 75 72 65 phil.Fc.Rlllb.deficiency,.nature
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bd40 e0 46 75 72 6d 61 6e 2c 80 57 2e 80 4c 2e 80 44 80 46 61 69 72 63 6c 6f 75 67 68 2c 80 52 2e 80 .Furman,.W..L..D.Fairclough,.R..
bd60 44 2e 80 48 75 68 6e 2c 80 61 6e 64 80 43 2e 80 42 2e 80 50 72 61 74 74 2e 80 31 39 39 31 2e 80 D..Huhn,.and.C..B..Pratt..1991..
bd80 80 54 68 65 72 61 70 65 75 74 69 63 80 65 66 66 65 63 74 73 80 61 6e 64 d0 01 15 00 00 0b 00 09 .Therapeutic.effects.and........
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be80 e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 48 61 73 73 61 6e 2c 80 4e 2e 46 2e 2c 80 44 2e 45 80 43 61 .0..........Hassan,.N.F.,.D.E.Ca
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bf80 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 cc 39 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 4b 61 6d ...(#..(#......9..0..........Kam
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c0c0 80 4d 61 72 74 69 6e 2c 80 61 6e 64 80 4c 2e 80 50 75 69 67 80 31 39 39 35 2e 80 80 54 68 65 d0 .Martin,.and.L..Puig.1995...The.
c0e0 01 15 00 00 0b 00 09 00 01 60 27 b0 22 25 00 01 20 15 00 d0 70 6f 6c 79 6d 6f 72 70 68 6f 6e 75 .........`'."%......polymorphonu
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c160 0d 00 0b 00 02 90 06 28 23 90 06 28 23 02 20 17 00 d0 d0 09 15 00 00 0b 00 09 00 01 30 2a 80 25 .......(#..(#...............0*.%
c180 28 00 01 20 15 00 d0 cc 31 31 2e e0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 4e 65 6d 75 6e 61 69 74 69 (.......11..0..........Nemunaiti
c1a0 73 2c 80 4a 2e 2c 80 53 2e 80 4e 2e 80 52 61 62 69 6e 6f 77 65 2c 80 61 6e 64 80 4a 2e 80 57 2e s,.J.,.S..N..Rabinowe,.and.J..W.
c1c0 80 53 69 6e 67 65 72 2e 80 31 39 39 31 2e 80 80 52 65 63 6f 6d 62 69 6e 61 6e 74 80 67 72 61 6e .Singer..1991...Recombinant.gran
c1e0 75 6c 6f 63 79 74 65 84 d0 14 15 00 00 0b 00 09 00 01 a0 05 f0 00 01 00 01 20 15 00 d0 6d 61 63 ulocyte......................mac
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c220 72 80 61 66 74 65 72 80 61 75 74 6f 6c 6f 67 6f 75 73 80 62 6f 6e 65 80 6d 61 72 72 6f 77 80 74 r.after.autologous.bone.marrow.t
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c2a0 30 0c 00 00 00 00 90 06 0c 00 e0 51 75 69 65 2c 80 50 2e 47 2e 2c 80 4a 2e 47 2e 80 57 68 69 74 0..........Quie,.P.G.,.J.G..Whit
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c320 80 70 6f 6c 79 6d 6f 72 70 68 6f 6e 75 63 6c 65 61 72 80 6c 65 75 6b 6f 63 79 74 65 73 3b 80 64 .polymorphonuclear.leukocytes;.d
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c3c0 06 0c 00 e0 52 69 76 65 72 61 84 4d 61 74 6f 73 2c 80 4c 80 52 2e 2c 80 52 2e 80 4d 2e 80 52 61 ....Rivera.Matos,.L.R.,.R..M..Ra
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c420 00 00 0b 00 09 00 01 20 0d 70 08 09 00 01 20 15 00 d0 47 2e 80 43 6c 65 61 72 79 2c 80 31 39 39 .........p........G..Cleary,.199
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c540 3a 38 33 30 84 38 33 37 2e :830.837.